那么，如何去除胎牛血清中的外泌體呢？

01 超速離心法 

顧名思義，該法基于超高速離心機(jī)。有些廠家建議操作為120000g，18h，4℃；

芬蘭團(tuán)隊(duì)（Roman Kornilov et al.）2018年在Journal of Extracellular Vesicles發(fā)表的文章介紹，以超濾的方式去除FBS中的外泌體：

Ultrafiltration EV-depleted FBS (UF-dFBS) was obtained by centrifuging regular FBS in Amicon ultra-15 centrifugal filters (ref: UFC910024, 100kDa Merk Millipore Ltd.,
Tullagreen, Carrigtwohill, Co. Cork, Ireland) for 55 min at 3,000 g. 

目前市面上已有若干品牌的EV-depleted Serum銷售，使用方法和常規(guī)胎牛血清一致，無需做額外處理。

當(dāng)然，我們重點(diǎn)需要考慮幾種方法的外泌體去除效率。

上文中提到的芬蘭團(tuán)隊(duì)將超速離心法、超濾法、S品牌的商品化EV-depleted FBS的外泌體去除效果做了比對(duì)。這里，我們看一下NTA（nanoparticles tracking analysis）的對(duì)比結(jié)果。

FBS：常規(guī)胎牛血清

UC-dFBS：超速離心處理的去外泌體血清（121896g，19h）

UF-dFBS：超濾處理的去外泌體血清

SBI-dFBS：S品牌的商品化去外泌體血清

 

該團(tuán)隊(duì)先對(duì)三組樣本做外泌體提取，將提取物用PBS重懸后用NTA檢測(cè)，獲取的濃度數(shù)據(jù)可以看出：芬蘭團(tuán)隊(duì)采用的超濾處理方式和S品牌的顆粒殘留量相近，均較低；而用超離處理方式的顆粒殘留量要高出1-2倍。從顆粒值推算外泌體去除率，超濾處理方式和S品牌達(dá)到96%，超離處理方式僅達(dá)88%。

所以，超速離心法的外泌體去除效果并不理想。部分其他文獻(xiàn)也有提及，如Tosar JP et al., J Extracell Vesicles, 2017；Wei Z et al., Sci Rep, 2016.

 

部分研究者會(huì)擔(dān)心胎牛血清經(jīng)處理后是否會(huì)影響細(xì)胞的生長，該團(tuán)隊(duì)也用幾組血清分別培養(yǎng)脂肪來源的MSC，結(jié)果發(fā)現(xiàn)并無明顯差異。

以上數(shù)據(jù)來自于：Efficient ultrafiltration based protocol to deplete extracellular vesicles from fetal bovine serum (DOI: 10.1080/20013078.2017.1422674)

超速離心法并不一定能達(dá)到很好的外泌體去除效果，
當(dāng)然目前也沒有一種方式是可以完全去除胎牛血清中的牛源外泌體。
除非使用無血清培養(yǎng)體系。

逍鵬生物推出的VivaCell 去外泌體血清使用改良版的超濾法，胎牛血清中的外泌體去除率可達(dá)97%（甚至更高）。

另外，生產(chǎn)全過程符合GMP要求，可有效預(yù)防支原體污染、交叉污染等，且產(chǎn)品在百級(jí)環(huán)境下過濾除菌分裝，可保證產(chǎn)品的無菌效果（見某批次COA截圖）。

我們推薦您使用VivaCell去外泌體血清，其有效去除胎牛血清中的牛源外泌體，避免了自行處理的不確定性、污染風(fēng)險(xiǎn)以及處理后的驗(yàn)證工作，為您節(jié)約時(shí)間成本。