高效分離外泌體的方法你找到了嗎
瀏覽次數(shù):3098 發(fā)布日期:2019-12-5
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關(guān)于分離外泌體的最佳方法,仍然眾說紛紜,尚無定論。在諸多方法中,尺寸排除色譜法(size exclusion chromatography,SEC)因可分離得到高純度和濃縮的樣本,被廣泛用來分離生物液體樣本。SEC可通過離心或重力流進(jìn)行。在重力流的作用下,一個(gè)樣本可以收集到多組分離組分,并可分析得到高純度外泌體
Exo-spinTM 技術(shù)介紹
Exo-spin™技術(shù)結(jié)合了沉淀法和SEC法,沉淀劑可以從樣本中將外泌體富集出來,但是只使用沉淀劑方法,會(huì)導(dǎo)致外泌體和雜蛋白等雜質(zhì)一起沉降,結(jié)合SEC純化管柱,可去除蛋白等雜質(zhì),大大提高了外泌體純度。
1.SEC原理介紹
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SEC方法是一種根據(jù)尺寸大小分離溶液中顆粒的方法。色譜柱中裝有穩(wěn)定的聚合物珠(樹脂),形成多孔基質(zhì)。當(dāng)將含有外泌體的溶液添加到SEC色譜柱中時(shí),較小的顆粒將被捕獲在孔中,而較大的顆粒則不會(huì)進(jìn)入孔中并先洗脫。因此,不同階段的洗脫液中會(huì)包含不同大小的顆粒,首先是大顆粒,其次是小顆粒。SEC方法是獲得高純度樣品的理想方法,可以將外泌體與其他非外泌體成分分開,同時(shí)適用于大體積和小體積的起始樣本。 |
2.Exo-spin技術(shù)操作步驟
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1. 離心去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片
2. 沉淀含有外泌體的部分(血液樣本(血漿和血清)無需此步驟)
3. 將含外泌體的沉淀物添加到Exo-spin™mini-HD色譜柱中,以進(jìn)行SEC純化。 |
從人血清提取外泌體效果驗(yàn)證
方法:
將100 µl人血清樣品添加到Exo-spin™mini-HD色譜柱中,然后添加100 µl PBS,并重復(fù)添加23次200 µl PBS,直至收集24次200 µl分離組分,分別檢測24個(gè)組分的外泌體顆粒(下圖藍(lán)色曲線)和蛋白濃度(下圖灰色曲線)。
結(jié)果分析:
使用Exo-spin™mini-HD的人血清分離譜
分離組分分析:
組分1-5,Exo-spin™mini-HD色譜柱未洗脫出外泌體,組分6和7包含外泌體,其中外泌體濃度在組分7中達(dá)到峰值,而且這兩個(gè)組分中的蛋白質(zhì)含量仍偏低。不需要的雜蛋白體積較小,則在隨后洗出。
總結(jié):
使用Exo-spin™mini-HD可以高效分離外泌體,用于分離從1到75 ml(細(xì)胞培養(yǎng)基,尿液,唾液,CSF和任何其他低蛋白生物液體)的起始樣品和從1到150 µl血液樣品(血清/血漿)。
Exo-spin™mini-HD是通過重力流的方式收獲外泌體,因此也無需特殊設(shè)備,操作更簡單。