細(xì)胞形態(tài)異常，魚(yú)骨圖來(lái)幫忙（五）

瀏覽次數(shù)：2317　發(fā)布日期：2019-10-31　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中
細(xì)胞輔助試劑是不可或缺的角色
那么它是怎么影響細(xì)胞形態(tài)的呢？
BI中國(guó)市場(chǎng)部帶您分析分析~
細(xì)胞輔助試劑可分為以下四部分：

接下來(lái)我們逐條分析！
（點(diǎn)擊圖片，可查看詳細(xì)魚(yú)骨圖鏈接）

胰酶

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什么情況下是胰酶可能出現(xiàn)了問(wèn)題呢？
一旦發(fā)生消化時(shí)間逐漸拉長(zhǎng)，或是細(xì)胞消化不下來(lái)，需注意胰酶是否已經(jīng)失活。由于胰酶為蛋白類(lèi)產(chǎn)品，反復(fù)凍融容易影響其活性。
品質(zhì)不佳的胰酶也容易帶入支原體或動(dòng)物源性污染源，BI所生產(chǎn)的胰酶經(jīng)過(guò)輻射照射處理，確保品質(zhì)及有效杜絕支原體的引入。
臨床培養(yǎng)可選用重組胰酶，以避免引入未知?jiǎng)游镌床≡w。

解決方案：

一般胰酶保存方式，建議15或50ml分裝后-20℃凍存，使用前必須37℃水浴或培養(yǎng)箱回溫，胰酶消化后使用不含鈣鎂的緩沖液清洗細(xì)胞，以稀釋殘余的胰酶。

若使用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)（血清中含有胰酶抑制蛋白），使用胰酶消化后可使用胰酶抑制劑終止殘存胰酶反應(yīng)。

Biological Industries（BI）可提供：
（點(diǎn)擊產(chǎn)品貨號(hào)，可查看產(chǎn)品鏈接）

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)
Trypsin Solution B（0.25%）, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red 胰蛋白酶（不含鈣和鎂，不含酚紅，不含EDTA）	03-046-1A/B
Trypsin Solution B（0.25%）,10X Conc, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red 胰蛋白酶（不含鈣和鎂，不含酚紅，10X濃縮液）	03-046-5B
Crystalline Trypsin Solution（0.02%）, without Phenol Red 水晶胰酶（不含鈣和鎂，不含酚紅，不含EDTA）	03-047-1A/B
Trypsin EDTA Solution A（0.25%）,EDTA（0.02%）, with Phenol Red 胰酶（胰蛋白酶0.25%，EDTA 0.02%）	03-050-1A/B
Trypsin EDTA（0.5%）, EDTA（0.2%）,10X Conc, without Phenol Red 胰酶（不含酚紅，10X濃縮液）	03-051-5B
Trypsin EDTA Solution B（0.25%）,EDTA（0.05%）, with Phenol Red 胰酶（胰蛋白酶0.25%，EDTA0.05%）	03-052-1A/B
Trypsin EDTA Solution C（0.05%）,EDTA（0.02%）, with Phenol Red 胰酶（胰蛋白酶0.05%，EDTA 0.02%）	03-053-1A/B
Trypsin EDTA Solution C（0.05%）,EDTA（0.02%）, without Phenol Red 胰酶（胰蛋白酶0.05%，EDTA 0.02%，無(wú)酚紅）	03-054-1A/B
Soybean Trypsin Inhibitor 50X Conc., 5mg/ml 大豆胰蛋白酶抑制劑	03-048-1C

緩沖液

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細(xì)胞在胰酶消化傳代之前，應(yīng)使用PBS洗滌殘留的完全培養(yǎng)基（完全培養(yǎng)基中的血清含有胰酶抑制蛋白），如果是對(duì)于一些更難消化的細(xì)胞，則必須使用不含Ca²⁺，Mg²⁺離子的PBS，因?yàn)檫@些離子也會(huì)抑制酶的活性。

解決方案：

Biological Industries（BI）可提供：
（點(diǎn)擊產(chǎn)品貨號(hào)，可查看產(chǎn)品鏈接）

產(chǎn)品名稱(chēng)	貨號(hào)
Hanks' Balanced Salt Solution，With Calcium and Magnesium With Phenol Red HBSS平衡鹽溶液（含鈣，鎂和酚紅）	02-015-1ACS
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), without Calcium and Magnesium DPBS緩沖液	02-023-1ACS
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), 10X Conc., without Calcium and Magnesium DPBS緩沖液（10X濃縮液）	02-023-5ACS
Phosphate Buffered Saline (PBS), PH=7.4, without Calcium and Magnesium PBS緩沖液	02-024-1ACS
Phosphate Buffered Saline (PBS), PH=7.4, without Calcium and Magnesium，10X Conc. PBS緩沖液（10X濃縮液）	02-024-5ACS

應(yīng)從正規(guī)供應(yīng)商處購(gòu)買(mǎi)，以確保品質(zhì)，如滲透壓、無(wú)菌等。

凍存液

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凍存液中的抗凍劑對(duì)細(xì)胞多少具有毒性，所以細(xì)胞解凍復(fù)蘇時(shí)，不宜在冷凍管內(nèi)懸浮太久，需在解凍復(fù)蘇后盡快轉(zhuǎn)移到完全培養(yǎng)基中，并在隔天置換掉含有抗凍劑的培養(yǎng)基。

細(xì)胞的狀態(tài)不佳，可提高培養(yǎng)基內(nèi)血清的比率，隔天就更換培養(yǎng)基，以置換掉含有DMSO的培養(yǎng)基。也有可能有些細(xì)胞本身冷凍后存活率不佳或冷凍時(shí)的細(xì)胞數(shù)較少。

如以上都有注意到，但復(fù)蘇率仍然不佳，就必須考慮是否為凍存操作步驟出了問(wèn)題，是否程序降溫、或凍存前細(xì)胞狀態(tài)已不佳（存活率低）。

（詳細(xì)凍存手法可戳此處）

解決方案：
建議選取指數(shù)增長(zhǎng)時(shí)期的細(xì)胞凍存，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較佳。
Biological Industries（BI）可提供：
（點(diǎn)擊產(chǎn)品貨號(hào)，可查看產(chǎn)品鏈接）

中文名稱(chēng)	貨號(hào)
無(wú)血清細(xì)胞凍存液	05-065-1
無(wú)血清間充質(zhì)干細(xì)胞凍存液	05-712-1
無(wú)血清干細(xì)胞凍存液	05-710-1
D10無(wú)血清凍存液	05-713-1

抗生素

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細(xì)胞在體內(nèi)是無(wú)菌生長(zhǎng)狀態(tài)，所以抗生素對(duì)細(xì)胞會(huì)有一定程度的影響。
已知某些抗生素對(duì)細(xì)胞的不同影響，如：
1. β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素（青霉素）--會(huì)影響蛋白質(zhì)合成，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)增殖；
2. 氨基糖苷類(lèi)/氨基糖類(lèi)（鏈霉素，卡那霉素，慶大霉素）--會(huì)減少蛋白質(zhì)合成，ATP水平降低，產(chǎn)生細(xì)胞毒性；
3. 內(nèi)酯類(lèi)（兩性霉素B/fungizone, 制霉菌素）--干擾細(xì)胞膜，產(chǎn)生細(xì)胞毒性；
所以一般常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)，請(qǐng)盡量降低抗生素使用率，避免上述影響及細(xì)菌抗藥性產(chǎn)生。

解決方案：

Biological Industries（BI）可提供：
（點(diǎn)擊產(chǎn)品貨號(hào)，可查看產(chǎn)品鏈接）

中文名稱(chēng)	貨號(hào)
兩性霉素B 250mg/ml	03-028-1B
兩性霉素B 2500mg/ml	03-029-1B
制真霉素	03-030-1C
青鏈雙抗	03-031-1B
青鏈雙抗，10X濃縮	03-031-5B
青鏈霉素+制真霉素三抗	03-032-1B
青鏈霉素+兩性霉素B 三抗	03-033-1B
青鏈霉素+新霉素三抗	03-034-1B
硫酸慶大霉素溶液	03-035-1B
卡那霉素溶液	03-049-1B

使用抗生素的時(shí)機(jī)：
1. 原代細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)---因?yàn)樵趶慕M織分離時(shí)易帶入污染；
2. 觀察到，并且確認(rèn)是微生物污染時(shí)（去除微生物后，應(yīng)立即停用抗生素）；
3. 盡量避免使用抗生素作為預(yù)防的方法；

好啦，本期介紹就到此處啦
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希望能幫助到各位噢
感謝大家對(duì)以色列BI的關(guān)注

--BI中國(guó)市場(chǎng)部

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