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本期我們將繼續(xù)介紹可能出現(xiàn)問(wèn)題的部分---培養(yǎng)基
如下圖所示:
接下來(lái)我們將從以下幾點(diǎn)進(jìn)行分析:
血清
不同批號(hào)血清內(nèi)的成分和營(yíng)養(yǎng)組成比例會(huì)不同,因此在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,需要經(jīng)過(guò)測(cè)試來(lái)找尋合適的血清批次。當(dāng)實(shí)驗(yàn)需要更換血清時(shí),細(xì)胞需要有一段適應(yīng)期。有些批號(hào)適合養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞或間充質(zhì)干細(xì)胞等。
解決方案:
1.建議少量換置,以使用體積1/3,1/2,2/3的方式漸進(jìn)式置換。基礎(chǔ)培養(yǎng)基
基礎(chǔ)培養(yǎng)基以形態(tài)可分為干粉培養(yǎng)基和液態(tài)培養(yǎng)基。添加因子
在臨床及科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)中,常需外加生長(zhǎng)因子活化細(xì)胞或促進(jìn)分化,建議最好選購(gòu)不含動(dòng)物或人衍生物質(zhì)的高活性,高純度重組蛋白,以確保產(chǎn)品活性符合嚴(yán)格規(guī)范。
常見(jiàn)使用的添加因子如:細(xì)胞因子(Cytokine),這是一類(lèi)小分子蛋白質(zhì)或多肽類(lèi),這些因子可以幫助細(xì)胞生長(zhǎng),促進(jìn)細(xì)胞活化,直接參與免疫調(diào)節(jié)作用和其他細(xì)胞因子的形成,也是細(xì)胞與細(xì)胞之間訊息傳遞的重要橋梁。在正常生理狀況下細(xì)胞受到刺激后也會(huì)自然分泌因子,不同種類(lèi)的細(xì)胞因子也會(huì)具有不同的免疫功能,然而過(guò)度的細(xì)胞因子分泌也可能會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng),可直接、間接誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞凋亡。
一些動(dòng)物來(lái)源,組分復(fù)雜的添加劑,如動(dòng)物源的基底質(zhì),批間差比全合成或單一組分試劑大,使用時(shí)必須小心注意。
解決方案:光照
避免紫外線(xiàn)照射培養(yǎng)基,以防培養(yǎng)基中的HEPES、核黃素及色氨酸形成過(guò)氧化氫自由基,對(duì)細(xì)胞造成毒害作用。
解決方案:谷氨酰胺
不同的細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)基中都需加入一定量的谷氨酰胺,作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源,參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。谷氨酰胺缺乏會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)不良甚至死亡。谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解,谷氨酰胺的降解會(huì)導(dǎo)致氨的形成,而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。加有谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存兩周以上時(shí),應(yīng)重新加入谷氨酰胺,或可直接選用添加長(zhǎng)效型谷氨酰胺的培養(yǎng)基。
解決方案:
1. BI可提供:
名稱(chēng) | 貨號(hào) |
L-Glutamine Solution, 29.2mg/ml in Saline (200 millimole/liter) 谷氨酰胺溶液 |
03-020-1 |
L-Alanyl-L-Glutamine (Stable Glutamine), 200 mM per liter 谷氨酰胺溶液(長(zhǎng)效型) |
03-022-1 |
2. 提供各式細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑。(點(diǎn)我)
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