羊水細胞培養(yǎng)和染色體制備，
是染色體病產前診斷的主要手段，
But
羊水中活細胞數(shù)少，
且羊水細胞培養(yǎng)技術要求高、
培養(yǎng)時間長、易污染、
所以羊水細胞培養(yǎng)成功率一直很低
培養(yǎng)成功了，
也會遇到分裂相較少，
形態(tài)不佳的問題。

不斷改進的培養(yǎng)技術
和質量有保證的培養(yǎng)基
對羊水細胞培養(yǎng)至關重要
那 么
。
。
。

離心后吸去上清液

留下的細胞沉淀

6.  用1ml BioAMF-2 重新懸浮細胞塊

1ml BI羊水培養(yǎng)基重新懸浮細胞

7.  取35mm培養(yǎng)皿，在蓋子上面及下半部側壁都做好標記（包括編號，姓名等）。為便于移動和觀察，將兩個小培養(yǎng)皿放入一個90mm培養(yǎng)皿中操作。

8.  滴加0.5ml細胞懸液至每塊蓋玻片中央，用移液管尖小心攤開（注意避免流出蓋玻片外）。

接種細胞

將細胞懸液攤勻在蓋玻片上

輕輕放入培養(yǎng)箱

9.  24小時之后，給每塊蓋玻片補加1.1ml BioAMF-2。
10.  當克隆大小、數(shù)量合適并顯示有絲分裂跡象時收獲細胞（培養(yǎng)7天后）。

滴加秋水仙素

2.  從培養(yǎng)箱中拿出培養(yǎng)皿至通風櫥，自此實驗期間避免移動培養(yǎng)皿。

3.  吸棄或傾倒掉培養(yǎng)液（正常情況下不必擔心蓋玻片掉出），用吸頭沿培養(yǎng)皿內壁緩慢加入2ml 0.48M KCl（39℃預熱）至蓋玻片上（避免吸頭直接接觸到玻片，2ml在培養(yǎng)皿內壁相對兩個地方分兩次加入）。

傾倒培養(yǎng)基等  

沿培養(yǎng)皿內壁加入KCl等

4.  培養(yǎng)皿加蓋，室溫（25℃左右）下孵育30min。

5.  沿培養(yǎng)皿內壁緩慢加入加1ml新鮮、預冷的固定液（75%甲醇：25%乙酸）至培養(yǎng)皿中，加蓋，室溫下放置10min。（每天早上配制，4℃冰箱預冷，使用過程中隨時放回冰箱）

6.  吸掉或傾倒液體，緩慢加入2ml新鮮、預冷的固定劑，加蓋，室溫下放置30min。

7.  吸掉或傾倒固定劑，加入2ml新鮮、預冷的固定劑。加蓋，室溫（25℃左右）下放置10min。

8.  吸去或傾倒固定劑，放于干燥室或化學通風櫥，保持室內濕度50%-60%，可以通過加濕器控制環(huán)境濕度。

9.  此時需要標記好載玻片以便染色，載玻片必須和培養(yǎng)皿相對應；

標記好載玻片

10.  輕輕擠壓培養(yǎng)皿，用針從培養(yǎng)皿中沿邊緣輕輕挑取蓋玻片，放在干凈吸水紙上靜置5~10min，干燥后加封片膠DPX貼于載玻片上（細胞面朝上）。注意避免蓋玻片刮擦或折斷等損壞。

輕輕擠壓培養(yǎng)皿，用針挑起蓋玻片

將蓋玻片放在吸水紙上晾干

將蓋玻片膠粘在載玻片上

11.  室溫下靜置2小時，直到DPX完全干燥。
12.  60℃烘箱中烘烤過夜。
13.  按要求進行染色體。

以色列BI生產的BIOAMF（醫(yī)療器械備案號：滬浦械備20150067號）
專門針對胎兒染色體核型分析的羊水和絨毛細胞原位培養(yǎng)而研發(fā)，
BIOAMF用于封閉和開放環(huán)境培養(yǎng)，解凍即可用，完全培養(yǎng)基。

緩沖效果更佳，
適用于封閉和開放培養(yǎng)系統(tǒng)，
增加細胞分裂中期產量，
有絲分裂中期染色形態(tài)更佳，條帶清晰。

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