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一項(xiàng)免疫檢驗(yàn)技術(shù)酶免疫試驗(yàn)的局限性分析

瀏覽次數(shù):3531 發(fā)布日期:2019-4-26  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
      酶免疫試驗(yàn)之所以能成為臨床免疫檢驗(yàn)中的主導(dǎo)技術(shù),是與它的方法上的特異性和靈敏性、操作上的簡(jiǎn)便性以及試劑的穩(wěn)定性分不開(kāi)的,還有很重要的一點(diǎn)是,其對(duì)環(huán)境沒(méi)有污染威脅。
      盡管如此,作為一項(xiàng)免疫檢驗(yàn)技術(shù),酶免疫試驗(yàn)還是有其局限性的,不但所檢測(cè)的生物學(xué)體液樣本如血清中有可能存在各種干擾實(shí)驗(yàn)的因素,而且在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,影響結(jié)果的因素也很多,尤其是進(jìn)行手工的ELISA測(cè)定時(shí)。
      此外,在定性ELISA測(cè)定中,陽(yáng)性判定值(CUT-OFF)的建立,是在一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)上的,相對(duì)于某個(gè)具體的受檢者來(lái)說(shuō),其有可能并不具備正確性。例如,使用ELISA方法檢測(cè)抗HCV及抗HIV或HBsAg,有時(shí)候,檢測(cè)所得的陽(yáng)性結(jié)也許并不是真正的陽(yáng)性,而需要使用其他方法如重組免疫印跡(recombinantimmunoblotas—say,RIBA)、蛋白印跡(Westernbl。t,WB)或中和試驗(yàn)來(lái)確認(rèn),才能報(bào)告陽(yáng)性。這里抗HCV和抗HIV的檢測(cè)均使用病毒部分的基因工程抗原,其他一些病毒如流感病毒、腮腺炎病毒和水痘病毒等感染人體后,亦或一些自身抗體,也有可能會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性反應(yīng)。
     HBsAg的測(cè)定主要是弱陽(yáng)性的問(wèn)題,這與ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”有關(guān)系,處于cut-off值周?chē)嗉?ldquo;灰區(qū)”的結(jié)果的可靠性通常較差,陽(yáng)性當(dāng)然需要確認(rèn),陰性卻也未必是真,這一點(diǎn)在血站篩檢獻(xiàn)血員血液時(shí)是非常重要的,必須引起注意,并采取適當(dāng)?shù)拇胧,防止此?lèi)嚴(yán)重影響人們健康的傳  染性疾病經(jīng)輸血傳播,本書(shū)后面的有關(guān)章還會(huì)對(duì)此問(wèn)題做詳細(xì)論述。此外,免疫測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體的特異反應(yīng),因此,如檢測(cè)抗原,除了要求抗體(單抗或多抗)是特異的外,還要求待測(cè)抗原上必須存在有能與所用抗體結(jié)合的抗原決定簇,如果因?yàn)榛蛲蛔儗?dǎo)致某些位點(diǎn)的不表達(dá),或者結(jié)合位點(diǎn)因?yàn)槟承┰虮环忾]或阻斷,都會(huì)影響抗體與抗原的結(jié)合,造成假陰性結(jié)果。
    如檢測(cè)抗體,則要求所用包被抗原應(yīng)盡可能包含所有的特異抗原決定簇,同時(shí)又盡可能不含有非特異的成分,這一點(diǎn)往往由于技術(shù)水平的限制而難以完全做到,因此,從某種意義上來(lái)說(shuō),假陽(yáng)性假陰性是不能完全避免的,盡管通過(guò)努力,可以將其降至很低的程度。這也是建立臨床免疫檢驗(yàn)方法所努力的方向。
來(lái)源:上海一研生物科技有限公司
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