Fast DNA Sample 和 FastPrep 儀器的介紹
FastDNA 試劑盒可從廣闊的各種來(lái)源中快速有效地分離出 genomic DNA,配套 FastPrep 儀器使用。動(dòng)植物組織、細(xì)菌、海藻、真菌和其他許多標(biāo)本,在 40 秒內(nèi)容易被裂解。這個(gè) benchtop 設(shè)備是一種專利性的垂直角度運(yùn)動(dòng),這種運(yùn)動(dòng)使得裂解微粒能同時(shí)從多方向、同步地碰撞。
FastPrep 儀器提供一種極其快速、有效、高度可重復(fù)勻質(zhì)化,超過(guò)了用酶消化、超聲破碎儀、渦旋、混合傳統(tǒng)提取方法。標(biāo)本放在裝有 Lysing Matrix A 的 2.0 ml 試管中。同時(shí)幾乎全部的標(biāo)本很容易用預(yù)先填充化合物進(jìn)行加工,另外,1/4 英尺的陶球用來(lái)加工堅(jiān)硬的標(biāo)本,比如:骨頭、軟骨和種子。在有 CLS 專樣下,用 Lysing Matrix A 處理,在 FastPrep 儀器中將會(huì)勻漿化。對(duì)植物組織來(lái)說(shuō), CLS-VF 用來(lái)和 PPS 連用。酵母、海藻和真菌在CLS-Y 中被裂解。CLS-TC 是用來(lái)裂解其他所以標(biāo)本。為了獲得最大的柔韌性,試劑會(huì)提供所有的緩沖液。裂解之后,標(biāo)本被離心到 pellet debris 和 lysing matrix。通過(guò)硅土基質(zhì) GENECLEAN 程序 DNA 被純化。提取的 DNA 準(zhǔn)備用來(lái)消化、電泳、PCR 和其他任何期望的用途。
適用研究范圍:
動(dòng)植物組織、細(xì)菌、酵母、藻類和真菌中分離基因組試劑盒
試劑盒組成:
品名 |
規(guī)格 |
Lysing Matrix A |
100*2 ml tubes |
1/4 Ceramic Spheres |
100 spheres |
Binding Matrix |
66 ml |
Concentrated SEWS-M |
12 ml |
DES |
25 ml |
CLS-VF |
90ml |
PPS |
25ml |
CLS-TC |
110ml |
CLS-Y |
110ml |
User manual |
1 each |
MSDS |
1 each |
Certificate of Analysis |
1 each |
實(shí)驗(yàn)者需自備的儀器及耗材
FastPrep® Instrument (fastprep 儀器)
Microcentrifuge that can freely spin 2.0 ml tubes (可裝載 2.0ml 管子的離心管) Microcentrifuge tubes (2.0 ml and 1.5 ml) (可裝載 1.5 和 2.0ml 管子的微型離心管) Rotator or low-speed vortex
(Optional) SPIN Filters and Catch Tubes, 100
操作步驟
1. 添加標(biāo)本到 Lysing Matrix A 管中。
在水中或者是等滲鹽溶液中,放置 100-200 mg 組織(新鮮、冰凍、干燥等)或者200μl細(xì)胞懸浮
液。對(duì)于細(xì)菌、酵母、海藻、或者是組織培養(yǎng)細(xì)胞是在懸浮液中生長(zhǎng),離心充足的培養(yǎng)體積,以便提供 50-100 mg 濕重的小球尺寸的標(biāo)本。(在水或者等滲鹽溶液中重新懸浮小球,獲得 200 μl 的最大懸浮體積。)
2. 根據(jù)下表添加適當(dāng)?shù)?CLS。
Processing Tissue From: |
Add to Sample Tube: |
Plant tissue |
800μl CLS-VF and 200 μl PPS |
Animal tissue, cultured cells, insects,
bacteria, bone, etc. |
1.0 ml CLS-TC |
Yeast,algae or fungi |
1.0 ml CLS-Y |
3. 在 FastPrep 儀器中用 6.0 設(shè)置的速度勻質(zhì)化 40 秒鐘。
4. 以 14,000 轉(zhuǎn)離心 5-10 分鐘到 pellet debris。
5. 轉(zhuǎn)移 600 --700μl 的懸浮液到一支 2.0 ml 微型離心管,加同等體積的Binding Matrix, 顛倒混勻。
注釋:在和下步之間,全部體積的完全混合,使用一支足夠大的試管來(lái)提供空間是很重要的。不建議使用圓錐底的試管。在這步一支 2.0 ml 微型離心管就足夠了。
6. 在室溫的條件下,攪拌器一般攪拌 5 分鐘進(jìn)行孵育。
注釋:一臺(tái)低速的旋渦機(jī)在這步可以用,但是操作必須小心,以免除去 DNA。
7. 在 14,000 轉(zhuǎn)離心 10 秒鐘到pellet Binding Matrix,去除上清液(懸浮液)。
8. 添加 500μl 備好的 SEWS-M,用吸量管輕輕地吹動(dòng)液體的力量使小球重新懸浮。
注釋:確保酒精加到濃縮的,參看 3.1 部分。
9. 14,000 轉(zhuǎn)離心 1 分鐘,去除上清液。
注釋:用旋轉(zhuǎn)式移液器轉(zhuǎn)移重新懸浮的Binding Matrix 到另一只旋轉(zhuǎn)式移液器。用 14,000 轉(zhuǎn)離心 1 分鐘,去除槍頭管里的物質(zhì)。
10. 用 14,000 轉(zhuǎn)離心 10 秒鐘,用小的吸量管移動(dòng)剩余液體。
注釋:如果用一支,用 14,000 轉(zhuǎn)離心第二次,用新的干凈的試管替代 the Catch Tube。
11. 在 100μl 的 DES 中,通過(guò)輕輕地重新懸浮的Binding Matrix 洗提 DNA。
12. 用 14,000 轉(zhuǎn)離心 1 分鐘,轉(zhuǎn)移洗提的 DNA 到干凈的微型離心管中。DNA 可為下游應(yīng)用作準(zhǔn)備。為延長(zhǎng)有效期將它存儲(chǔ)在-20°C 或者是 4°C,直到使用。
注釋:用一支吸量管小心轉(zhuǎn)移DNA,以避免轉(zhuǎn)移帶有洗提 DNA 的 Binding Matrix 微粒,避免 shearing。注釋:用 SPIN 移液器,在 14,000 轉(zhuǎn)離心 1 分鐘,將洗提的DNA 放入干凈的catch tube。DNA 可為下游應(yīng)用作準(zhǔn)備。為延長(zhǎng)有效期將它存儲(chǔ)在-20°C 或者是 4°C,直到使用。