細(xì)胞有絲分裂的實驗操作步驟
瀏覽次數(shù):3749 發(fā)布日期:2018-11-15
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細(xì)胞有絲割裂指數(shù)(mitotic index,MI)是指歸于割裂期的細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分率.用于表明細(xì)胞增殖旺盛的程度,也可用于檢查藥物對細(xì)胞增殖能力的影響。用蓋玻片培育法培育細(xì)胞,做固定和染色后,鏡下調(diào)查和計數(shù)1000個細(xì)胞中處于割裂期的細(xì)胞數(shù)并核算MI。
(一)材料
1.待檢資料(藥物)。
2.細(xì)胞培育成層的貼壁細(xì)胞。
3.試劑 甲醇、3%吉姆薩染液。
4.器材CO2培育箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2.2 cm×2.2 cm,需預(yù)先清潔和滅菌處理)、塑料培育皿(3.5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹膠。
(二)試驗辦法
1.將細(xì)胞消化成單個細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分瓶培育,分紅不加藥的對照組和加人不一樣劑量藥物的試驗組。
2.細(xì)胞傳代培育的辦法培育細(xì)胞,并制成濃度為105/ml的細(xì)胞懸液。
3.將清潔和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培育皿中,將細(xì)胞懸液搖勻后接種于培育皿中,各皿中接種量一樣。
4.別離于培育24 h、48ht和72h后從培育皿中取出蓋玻片,在Hanks液中漂洗2~3次。
5.先用甲醇固定30 min,再用吉姆薩染液染色。曬干后用中性樹膠封片。
6.油鏡下或高倍鏡下計數(shù)1000個細(xì)胞中處于割裂期的細(xì)胞數(shù)。
7.核算MI按下列公式核算MI。
(三)成果與分析
將對照組和藥物組的試驗成果繪制成直方圖并加以比較,也可繪制成MI曲線進(jìn)行比較:
(四)注意事項
1.為了削減誤差,試驗者有必要了解各期割裂象細(xì)胞的形狀特征,該試驗從頭到尾最好由一人完結(jié),當(dāng)兩人以上調(diào)查時,應(yīng)把握一樣的標(biāo)準(zhǔn)。
2.MI曲線與細(xì)胞生長曲線趨勢根本相似,但不徹底一樣。如果在細(xì)胞增長達(dá)飽和密壁并進(jìn)入中止期后.細(xì)胞數(shù)量許多,而割裂象細(xì)胞可徹底消失。
3.細(xì)胞在蓋玻片上的密度常不均勻,細(xì)胞密集區(qū)與稀疏區(qū)的割裂象細(xì)胞數(shù)目也許不一樣。計數(shù)時要挑選密度近似區(qū),以削減試驗誤差。