市場上的胎牛血清種類繁多,魚龍混雜,很多科研工作者,特別是剛接觸細胞培養(yǎng)的人,難以分辨胎牛血清質量的優(yōu)劣。選購胎牛血清請注意以下幾點:
一、外觀
拿到胎牛血清,最先接觸的是血清外觀,對于缺少細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說,外觀的判斷尤為重要
1、顏色
根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴謹規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。
國產(chǎn)血清的采血點很分散,大多是由屠戶采血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當然,國產(chǎn)血清也很少有標準意義上的胎牛血清。
進口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂。
2、沉淀
很多血清客戶,會發(fā)現(xiàn)進口血清有沉淀,從而懷疑血清的質量問題,這是沒有根據(jù)的。
血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對血清質量沒有任何影響,沉淀的產(chǎn)生原因很多,和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關。
國產(chǎn)的血清,大多來自北方,由于價格低廉,保存環(huán)境都不好,從采血、冷凍、運輸?shù)缴a(chǎn)會經(jīng)過多次凍融,每次凍融過程,就會析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”,很少有沉淀產(chǎn)生。
進口的胎牛血清,過濾分裝前很少會反復凍融,生產(chǎn)后的成品也是清澈的,但隨著時間的推移,血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然,進口的新生牛血清,一般牛齡都在2周左右,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產(chǎn)后血清可能會渾濁,甚至有大量沉淀。
當然,購買回來的血清都是冰凍狀態(tài),使用時需要融化,融化過程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進行,否則沉淀相對較多,雖然沉淀并不直接影響血清的質量,但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。
3、澄清度
進口胎牛血清由于蛋白和脂類等物質含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而國產(chǎn)血清,因為絕大多數(shù)是新生牛血清,相對而言更加粘稠,顏色略深,這對于初步接觸血清的人很難判斷,但把兩者進行對比,可容易分辨。
二、主要技術指標
目前國內血清的質量標準是2005版的《中華人民共和國藥典》,主要指標有以下幾點:
1、內毒素
標準為不高于5EU/ml。內毒素是細菌破碎后細胞壁的成分,因此內毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過程中的無菌操作情況。
2、總蛋白含量
胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛,數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。
3、血紅蛋白
標準為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。
4、pH
國產(chǎn)血清,大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關,這也能用來初步鑒別血清的來源。
5、微生物
包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等。隨著國內血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1um過濾,大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清除,但對血清質量影響不大。病原性病毒,特別是BVDV,在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國產(chǎn)血清質量的重要因素之一,而進口胎牛血清中基本都控制的很好。
6、免疫球蛋白
國產(chǎn)血清的只是定性檢測,結果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出采血的時的牛齡情況,國產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。
7、其它
不管是國產(chǎn)還是進口血清,都是不測抗生素的(無四環(huán)素胎牛血清除外)。國外,抗生素的使用很嚴格,用量也很少,每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國內,抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象,血清中殘留很高,對細胞培養(yǎng)極為不利,這是國產(chǎn)血清質量差的根本原因。