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蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

瀏覽次數(shù):4614 發(fā)布日期:2018-7-27  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào):YJ1270 規(guī)格:50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。

紫外分光光度法

 

試劑一:粉劑 0.1g×3 支,4℃保存。(使用前根據(jù)樣品數(shù),每支加 1mL 水溶解,每支為 10 個(gè)樣品用量)

試劑二:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。

試劑五:根據(jù)測(cè)定樣品量,將乙酸乙酯和無(wú)水乙醇等體積混合。(自備) 試劑六:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明:

蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過(guò)程中的早期標(biāo)志,其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小,是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。

羰基與 2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成紅色 2,4-二硝基苯腙,在 370nm 處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計(jì)、1 mL 石英比色皿、蒸餾水, 無(wú)水乙醇和乙酸乙酯。

操作步驟:

一、樣品處理

組織樣品:稱取約 0.1g 組織樣品,加入 1mL 提取液,充分勻漿后于 4℃,5000rpm 離心 10min, 取上清,加入 0.1mL 試劑一,室溫放置 10min,4℃,12000rpm 離心 10min,取上清,然后取 20μL 測(cè)定蛋白含量,剩余的作為待測(cè)樣品。

二、測(cè)定步驟和操作表

 

空白管

測(cè)定管

樣品(mL)

0.2

0.2

試劑二(mL)

 

0.4

試劑三(mL)

0.4

 

混勻,37℃避光反應(yīng) 1h

試劑四(mL)

0.5

0.5

靜置 5min,4℃,12000rpm 離心 15min,棄上清,留沉淀

試劑五(mL)

1.0

1.0

 

漩渦混勻,4℃,12000rpm 離心 10min,棄上清,留沉淀。重復(fù) 3 次

試劑六(mL)

1.0

1.0

漩渦混勻,37℃溫育 15min,沉淀全部溶解后,4℃,12000rpm 離心 15min,取

上清 1mL 于石英比色皿,試劑六調(diào)零,測(cè)定 OD370

三、計(jì)算公式

1、按蛋白濃度計(jì)算:

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/mg prot)=(OD370 測(cè)定管-OD370 空白管)÷(ε×d)×V÷(Cpr×V 樣品)

=(OD370 測(cè)定管-OD370 空白管)÷4.4÷Cpr;

2、按樣本鮮重計(jì)算:

蛋白質(zhì)羰基含量(μmol/g 鮮重)=(OD370 測(cè)定管-OD370 空白管)÷(ε×d)×V÷(W×V 樣品÷V 提取)

=(OD370 測(cè)定管-OD370 空白管)÷4÷W

ε:蛋白質(zhì)羰基消光系數(shù),22 mL•μmol-1•cm-1;d:比色皿光徑,1cm;V:加入試劑六體積,1mL;

V 樣品:加入樣本體積,0.2 mL; V 提。杭尤胩崛∫杭霸噭┮惑w積,1.1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL。W:樣品質(zhì)量,g。

注意事項(xiàng):

1. 試劑一使用之前根據(jù)要測(cè)定的樣品數(shù)現(xiàn)配,配置好后 4℃保存,若變?yōu)楹谏瑒t不能使用。

2. 試劑二見(jiàn)光易分解,反應(yīng)需嚴(yán)格避光。

來(lái)源:上海一基實(shí)業(yè)有限公司
聯(lián)系電話:021-60536261
E-mail:2851717098@qq.com

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