鴨源性成分核酸檢測試劑盒（一管式PCR-熒光探針法SB標(biāo)準(zhǔn)）使用說明書

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鴨源性成分核酸檢測試劑盒（一管式PCR-熒光探針法SB標(biāo)準(zhǔn)）

◆ 產(chǎn)品說明

物種鑒定系列可針對食品、飼料等樣品中動物源性成分的特異核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，通過實時擴(kuò)增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于鴨源性成分的檢測，檢出限為0.1%。

◆ 產(chǎn)品組成（96測試）

021052LⅡ
試劑	含量
A-鴨源-P	20μL × 8管× 12排
NG-P	100μL × 3支
PG-鴨源-P	100μL × 2支

適用儀器

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600等實時熒光PCR儀。

◆ 自備耗材和儀器

①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套滅菌吸頭；③離心機(jī)；④渦旋混勻器；⑤金屬浴。

◆ 注意事項

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。

1）第一區(qū)：樣本制備區(qū)。

2）第二區(qū)：模板添加區(qū)。

3）第三區(qū)：擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)。

★ 分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2．實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，不同區(qū)域獨立使用工具，需更換手套和實驗服。

3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴(yán)格按照說明書要求在冰盒上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心30秒，并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴(kuò)增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆樣品處理

參照《SB/T 10923-2012 肉及肉制品中動物源性成分的測定實時熒光PCR法》或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，制備的樣本保存待用。

樣品的采集和制備是動物源性鑒別的重要步驟，為防止交叉污染，應(yīng)使用一次性消耗品，研缽應(yīng)經(jīng)160℃干烤2 h，其他不宜干烤或高壓處理的器皿應(yīng)使用1%次氯酸鈉溶液浸泡。

取樣應(yīng)盡量采取肌肉組織，對于同一批樣品，應(yīng)多點采集合并后，作為一份樣品進(jìn)行均質(zhì)，提取DNA。

采樣過程應(yīng)快速完成，將采取的樣品迅速放入組織攪碎機(jī)中進(jìn)行均質(zhì)成糜狀，充分混勻，取0.1 g充分混勻的樣品，采用液氮研磨或均質(zhì)器均質(zhì)。

詳細(xì)步驟請按照標(biāo)準(zhǔn)操作或查閱食安通軟件。

◆ 實驗操作

1.模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套動物基因組DNA提取試劑盒，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2.添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒上進(jìn)行）

剪下所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液的PCR管，放置在室溫待解凍后，離心30秒后揭開封口膜，向每管反應(yīng)液中分別加入5μL模板，順序為NG、待測樣品模板、PG-鴨源-P。蓋好配套的PCR管蓋后，渦旋混勻30s，離心1min，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。

3.擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

使用熒光定量PCR儀，熒光基團(tuán)選擇FAM，淬滅基團(tuán)選擇TAMRA。

按下列條件設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)：