近期，上海公衛(wèi)臨床研究中心的一位研究生應(yīng)用兩種轉(zhuǎn)染試劑Turbofect transfection reagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen）進(jìn)行了一次RNA轉(zhuǎn)染比較。比較情況如下：

實(shí)驗(yàn)方法

轉(zhuǎn)染試劑：Turbofect transfection reagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen Biosystem Co,Ltd）

待處理細(xì)胞：human CD8+T 細(xì)胞

1.針對Turbofect轉(zhuǎn)染的方法

每孔培養(yǎng)體積均為100μL，細(xì)胞數(shù)目在105左右。

取0.5μLagomir，加入9.5μL無血清RPMI1640，充分混勻；

取0.2μL Turbofect transfection reagent和agomir稀釋液充分混合。

轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成； 混勻后室溫下孵育15-20分鐘，直接取10μL加入已鋪好細(xì)胞的孔中，繼續(xù)培養(yǎng)24h收取細(xì)胞，用PBS洗滌3次以上，以備RNA抽提。

轉(zhuǎn)染Mix的配制： 100nMago/N.C.：（0.5μLagomir+0.2μLTurbofect+9.3μL無血清的RPMI1640）×2.5=1.25+0.5+23.25

2.EntransterTM-R4000轉(zhuǎn)染

每孔培養(yǎng)體積均為100μL，細(xì)胞數(shù)目在105左右。

取0.5μLagomir，加入9.5μL無血清RPMI1640，充分混勻，制成10μLagomir稀釋液；

取0.25μL EntransterTM-R4000，然后加入9.75μL無血清稀釋液體，充分混勻，制成10μLEntransterTM-R4000稀釋液；

將EntransterTM-R4000稀釋液和agomir稀釋液充分混合（可用振蕩器或加樣器吹吸10次以上），室溫靜置15分鐘。

轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成；

將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細(xì)胞懸液中，前后移動培養(yǎng)皿，混合均勻；

轉(zhuǎn)染后6h觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h后收取細(xì)胞，用PBS洗滌3次以上，以備RNA抽提。

轉(zhuǎn)染Mix的配制：100nMago/N.C.：（0.5μLagomir+9.5μL無血清的RPMI1640）×2.5=1.25+23.75；Etranster稀釋液：（0.25μLEtranster+9.75μL無血清的RPMI1640）×5=1.25+48.75（室溫靜置5分鐘），取20μL至ago和N.C.管中，室溫靜置15分鐘。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)論：從目的miRNA表達(dá)水平的檢測結(jié)果來看，轉(zhuǎn)染24 h后，英格恩生物公司（EngreenBiosystem）的EntransterTM-R4000 (ago/NC:422912倍)轉(zhuǎn)染試劑的效果優(yōu)于Turbofect轉(zhuǎn)染試劑 (ago/NC: 285870倍)。

討論：從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，英格恩生物公司（Engreen Biosystem）的Entransten-R4000(ago/NC: 422912倍)轉(zhuǎn)染試劑的效果優(yōu)于Turbofect轉(zhuǎn)染試劑 (ago/NC:285870倍)。EntransterTM-R4000是英格恩生物（EngreenBiosystem）最新研發(fā)合成的針對siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的轉(zhuǎn)染試劑。EntransterTM-R4000不僅可以轉(zhuǎn)染小RNA，而且針對mRNA等長鏈RNA優(yōu)化。該試劑可將RNA導(dǎo)入多種細(xì)胞系，包括原代細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。無論有無血清、抗生素存在均可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率。