質(zhì)譜法正在快速成長為微量元素(如維生素B1、B6、B12和D)、類固醇、荷爾蒙和許多其他其他藥物的首選定量分析方法。對于臨床實驗室,質(zhì)譜技術的瓶頸并不在于分析本身,而在于如何預處理樣品,去除可能干擾結(jié)果的蛋白質(zhì)和其他生物學分子。
過去30年,人們對于微量元素在維持老齡化人群健康方面的作用的認識,越來越深刻。但僅僅在過去十年左右,能夠有效檢測飲食或代謝之中的缺乏微量元素的可靠實驗方法才成為常態(tài)。認識的深入和有效檢測手段的擴展,導致臨床實驗室從主要或輔助機構接收到的導致這方面的需求激增,這就要求臨床實驗室變革工作方式變化,以應對日益增長的工作負擔。
維生素B1(硫胺素)和B6(吡哆醇)分別負責從葡萄糖和脂肪中提取能量,同時參與很多其他代謝通路。對這兩種維生素的檢測需求也出現(xiàn)了大量增長。荷蘭Noordwest Ziekenhuisgroep (Northwest Clinics) Alkmaar 的臨床化學部門一年要進行這類代謝物的檢測數(shù)量就要超過19000起。該部門臨床化學家Edwin ten Boekel表示:“我們部門是Northwest Clinics的兩大實驗室之一,服務北荷蘭大約60萬人口。我們實驗室平時非常忙碌,每天要出具超過1萬名病人的報告結(jié)果,因此需要采取快速、有效的分析流程,確保我們能夠應付這一工作負擔“。
“早在20多年前,我們便已開始在HPLC系統(tǒng)上定量維生素B1和B6,但這一實驗涉及一個衍生步驟,需要進行長時間的后續(xù)分析。此外,該實驗還需要大量的人工加樣技術,因而要花上大量時間進行高度重讀的工作。鑒于此,我們最近開始尋求實現(xiàn)樣品制備自動化的方法,以期提高通量、降低人為誤差、消除加樣錯誤。我們并未直接對自己現(xiàn)有的實驗方案進行自動化處理,而是選擇過渡到采用質(zhì)譜(UHPLC-MSMS)技術的高效液相色譜法,利用支持自動化的蛋白沉淀步驟進行分析錢樣品處理。
我們考察了很多可實現(xiàn)這類樣品制備自動化的系統(tǒng),F(xiàn)reedom EVO®平臺在阿姆斯特丹的展示令我印象非深刻。我們的目標是實現(xiàn)LC-MS樣品制備完全自動化,根據(jù)Tecan的建議,我們購買了一臺Freedom EVO 150工作站。
我們實驗室的Freedom EVO于2016年夏季開始試用,并針對96孔板形式應用進行了優(yōu)化。含有患者溶解全血樣品的反應板、校準劑和質(zhì)控樣品放置在儀器架上,向每個孔中加入三氯乙酸(TCA),以便沉淀血漿蛋白。隨后密封檢測板,并在離心機之中離心,然后采用Tecan系統(tǒng),將每個孔的上清液轉(zhuǎn)移到一個新的96孔板中。隨后,將這塊可以直接進行分析的檢測板重新密封,轉(zhuǎn)移到一臺獨立的UHPLC-MSMS系統(tǒng)上。Edwin補充說:“盡管我們之前并沒有使用Tecan平臺的經(jīng)驗,但一旦您熟悉Freedom EVO,就會發(fā)現(xiàn)這一系統(tǒng)非常易用。Tecan的客戶支持部門的工作也非常出色;他們非常友善,我們的咨詢從未出現(xiàn)長時間等待無回復的情況。我們現(xiàn)在已經(jīng)在這款儀器上進行了多項試驗方案,相對于我們之前的移液操作步驟,自動化操作的可重復性提高了不少。我們通過反復處理不同批次的同一樣品,進行了對照試驗。通過使用手持式條形碼掃描儀和條形碼標記的微孔板,我們還能夠提高可追溯性——這對診斷實驗室而言無疑十分重要。
最重要的是,F(xiàn)reedom EVO的自動化樣品制備將處理等量樣品所需的時間減半。它讓我們不僅避免了員工的樣品重復移液工作,更解放了人力從事其他工作任務。Edwin總結(jié)道。
NWZ的Freedom EVO可提供全自動的分析前處理
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