Golgi-Cox浸染法是研究神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞正常和非正常形態(tài)最有效的方法之一。使用Golgi技術(shù)，在藥物處理過的動物腦中和因神經(jīng)疾病死亡的病人腦中發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)樹突和樹突棘微小的形態(tài)改變。然而Golgi染色法不可靠且費(fèi)時(shí)，成為這種方法廣泛應(yīng)用的障礙。

FD Rapid GolgiStain^TM Kit(FD快速Golgi染色試劑盒) 是根據(jù)Ramon-Moliner, Glaser2和Van der Loos5所闡述的方法的原則設(shè)計(jì)的。這個(gè)試劑盒不僅極大改進(jìn)并簡化了Golgi-Cox技術(shù)，而且被證實(shí)在顯示神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞，特別是樹突棘的形態(tài)細(xì)節(jié)上極為靈敏可靠。FD Rapid GolgiStain^TM Kit已被廣泛測試并用于數(shù)種動物腦及去世病人的腦。

使用步驟：

一、組織制備

  1. 殺死動物之前對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行深度麻醉。應(yīng)盡快地從顱骨中取出動物的腦（或死去病人的腦），但操作時(shí)必須非常小心以免損傷或壓迫組織。

  2. 用雙蒸水或 Milli-Q 水快速沖掉組織表面的血液。

3. 把組織浸泡在由溶液 A 和 B 等體積混合的浸漬液中，室溫下黑暗保存兩周。浸泡 6 個(gè)小時(shí)以后或次日更換新的浸漬液。

4. 轉(zhuǎn)移組織到溶液 C 中室溫黑暗至少 72 小時(shí)（可長達(dá) 1 周）。 24 小時(shí)后或次日至少更換一次溶液。

5. 在-20℃到-22℃的條件下用冷凍切片機(jī)將組織切成 100-200 um 厚的薄片。也可用其它型號的顯微鏡薄片切片機(jī)包括滑動切片機(jī)和振動切片機(jī)。用樣本回收器（試劑盒提供）把樣本轉(zhuǎn)移到含有溶液 C（試劑盒所提供的滴瓶是方便溶液 C 滴到載玻片上）的明膠包被的顯微鏡載玻片上。載玻片上多余的溶液用吸管吸走并用濾紙吸干（載玻片上的溶液必須盡可能地吸干否則切片將從載玻片上脫落下來）。切片可以室溫下自然風(fēng)干（不能用電風(fēng)扇或電熱板使其干燥）。為取得最佳結(jié)果，應(yīng)盡快地完成切片，制備好的切片如果保存于載玻片盒中，室溫黑暗條件下最長可保存 3 天。

二、染色步驟

  1. 用雙蒸水或 Milli-Q 水沖洗切片兩次，每次 4 分鐘。

2. 把切片置于由 1 份溶液 D， 1 份溶液 E 和 2 份的雙蒸水或 Milli-Q 水組成的混合液中 10 分鐘。

3. 用蒸餾水或 Milli-Q 水沖洗切片兩次，每次 4 分鐘（蒸餾水應(yīng)頻繁更換新的）。

4. 用結(jié)晶紫或硫堇對切片進(jìn)行復(fù)染（可選步驟）。

5. 在 50%， 75%和 95%的乙醇中對切片進(jìn)行脫水，每個(gè)濃度梯度脫水 4 分鐘（不要跳過任何一個(gè)步驟）。

6. 然后在無水乙醇中對切片進(jìn)行脫水， 4 次，每次 4 分鐘（不要延長時(shí)間）。

7. 在二甲苯中透明， 3 次，每次 4 分鐘，并且用樹脂封片劑對蓋玻片進(jìn)行封片。

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