AMRESCO瓊脂糖使用指導(dǎo)

產(chǎn)品： 瓊脂糖

貨號(hào)： 0710 0815 E776

    E434     J234      X174

正確的加熱方式對(duì)瓊脂糖的充分溶解和凝結(jié)至關(guān)重要，在此，我們提供以下幾點(diǎn)作為正確制備瓊脂糖凝膠的操作參考。

*AMRESCO瓊脂糖加熱溶解所需時(shí)間短。

*瓊脂糖在TAE或者TBE緩沖液中不溶解，加熱時(shí)，瓊脂糖顆粒水化形成溶液，水化是時(shí)間依賴的，不同的瓊脂糖水化點(diǎn)不同。AMRESCO瓊脂糖純度高，超微顆粒，非常適合作為電泳實(shí)驗(yàn)載體。對(duì)比于其他的瓊脂糖，AMRESCO瓊脂糖水化速度快，使用者無(wú)需煮沸過長(zhǎng)時(shí)間，否則易導(dǎo)致膠液濃稠，不利于混勻，凝膠后易破損。

AMRESCO瓊脂糖凝膠制備

用1×TBE溶液配制1%濃度瓊脂糖凝膠

• 用于制備膠液的錐形瓶體積應(yīng)為膠液體積的2-4倍，緩慢向緩沖液中加入瓊脂糖，邊加邊攪拌，防止瓊脂糖聚集。記錄瓶體和溶液總重量。
• 微波爐高火加熱30s，根據(jù)配制的溶液體積調(diào)整加熱時(shí)間。加熱時(shí)間與微波爐、瓶體大小和瓊脂糖濃度有關(guān)。
• 搖勻瓊脂糖溶液。
• 再次高火加熱30s，搖勻瓊脂糖溶液。
• 將溶液再次放回微波爐，高火加熱至沸騰（大約10-35s）。接觸移動(dòng)時(shí)瓊脂糖膠液可能會(huì)劇烈沸騰，小心操作，避免燙傷。從微波爐拿出后，室溫冷卻1-2min，輕輕搖晃使液體里的氣泡溢出。
• 重新放回微波爐，高火加熱，使之沸騰約15s，觀察瓊脂糖的溶解狀態(tài)，如果仍有顆粒存在，重復(fù)該步驟直至所有晶體全部溶解。
• 待瓊脂糖完全溶解成液體，重新稱量總重量，計(jì)算蒸發(fā)液體量，用水補(bǔ)齊至原始重量，搖勻液體。
• 建議膠液冷卻至50-55℃時(shí)灌膠，有利于凝膠孔徑均勻一致，不至于損傷制膠儀。灌膠前輕輕搖晃瓊脂糖溶液，釋放膠液中殘存的氣泡。
• 向制膠槽中灌膠，一般膠的厚度3-5mm，灌膠后盡量排除梳孔之間或底部的氣泡。
• 在室溫放置（30-45min）使膠充分凝結(jié)。

如果要制備不同濃度和不同體積的凝膠，請(qǐng)注意以下兩點(diǎn)：

• 在凝膠溶液煮沸前至少進(jìn)行2次搖勻。
• 膠液沸騰后，每隔10-15s觀察一次膠液溶解程度（間隔時(shí)間取決于膠液濃度和體積）。

Guidelines for small fragment resolution using AMRESCO Agaroses

以上數(shù)據(jù)僅供參考，具體選擇依據(jù)實(shí)際試驗(yàn)要求。

參考電壓5V/cm，低熔點(diǎn)瓊脂糖電泳超過1小時(shí)者，選擇較低電壓3-4V/cm或者在4℃條件下電泳。