實(shí)驗(yàn)原理

染色方法：
革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中最廣泛使用的一種鑒別染色法。1884 年 由丹麥醫(yī)師 Gram 創(chuàng)立。方法是先將細(xì)菌用結(jié)晶紫染色，加媒染劑（增加染料和 細(xì)胞的親和力）后，用脫色劑（酒精或丙酮）脫色，再用復(fù)染劑染色。如果細(xì)菌 不被脫色而保存原染液顏色者為革蘭陽(yáng)性菌(G＋)；如被脫色，而染上復(fù)染液的顏 色者為革蘭陰性菌(G-)。此染色法可將所有具有細(xì)胞壁的細(xì)菌分為兩大類：革蘭 陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌。

單染色法：只能觀察微生物的大小、形狀、和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。

復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有： 革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。

染色原理：現(xiàn)在認(rèn)為細(xì)菌對(duì)革蘭染色的不同反應(yīng)主要是革蘭陽(yáng)性菌和陰性菌 的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成不同。革蘭陽(yáng)性菌的細(xì)胞壁較厚，肽聚糖含量多，且交 聯(lián)度大，脂類含量少，經(jīng) 95％乙醇脫色時(shí)，肽聚糖層的孔徑變小，通透性降低， 與細(xì)胞結(jié)合的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物不易被脫掉，因此細(xì)胞仍保留初染時(shí)的顏色。 而革蘭陰性菌的細(xì)胞壁較薄，含有較多的類脂質(zhì)，而肽聚糖的含量較少，乙醇脫 色時(shí)溶解外層類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易 于滲出，結(jié)果細(xì)胞被脫色，經(jīng)復(fù)染后，又染上復(fù)染的顏色。

實(shí)驗(yàn)試劑

革蘭氏染色液一套
結(jié)晶紫
碘液
95%乙醇
番紅花紅
孔雀綠

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

1. 菌種應(yīng)選用對(duì)數(shù)期的菌種；
2. 涂片不易過(guò)厚，涂片薄而均勻?yàn)楹茫?
3. 脫色不足或脫色過(guò)度均會(huì)造成革蘭染色的假陽(yáng)性或假陰性，脫色時(shí)間 取決于涂片厚度、室溫等；
4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束 請(qǐng)確保油鏡頭擦拭干凈。