實(shí)驗(yàn)原理

線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場所。細(xì)胞的各項(xiàng)活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的。活體染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠B 是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細(xì)胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(tài)呈藍(lán)綠色，而在周圍的細(xì)胞質(zhì)中染料被還原，成為無色狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)試劑

1. 1/300 詹納斯綠B 染液

2. Ringer 氏液(哺乳類用)

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

1. 顯微鏡

2. 手術(shù)器材一套

3. 解剖盤

4. 小平皿

5. 載片

6. 蓋片

7. 吸水紙

8. 10ml注射器

9. 吸管

實(shí)驗(yàn)材料

兔子一只、線粒體的電鏡照片。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 兔肝細(xì)胞線粒體的活體染色

   1) 用空氣栓塞處死兔子，置于解剖盤內(nèi)，迅速打開腹腔。

   2) 取兔肝邊緣較薄的肝組織一小塊（2～3mm3），放入盛有Ringer 氏液的平皿內(nèi)洗去血液(用鑷子輕壓)，用吸管吸去Ringer 氏液，在平皿內(nèi)加1／300 詹納斯綠B 染液，讓組織塊上表面露在染液外面，使細(xì)胞內(nèi)線粒體的酶系可進(jìn)行充分的氧化，這樣才有利于保持染料的氧化狀態(tài)，使線粒體著色。當(dāng)組織塊邊緣染成籃色時(shí)即可，一般需要染30 分鐘。

   3) 染色后，將組織塊移到載片上，用鑷子將組織塊拉碎，就會有一些細(xì)胞或細(xì)胞群從組織塊脫離。將稍大的組織塊去掉，使游離的細(xì)胞或細(xì)胞群留在載片上，加一滴Ringer 氏液，蓋上蓋片，吸去多余水分。

2. 結(jié)果

   1) 顯微鏡觀察，肝細(xì)胞質(zhì)中許多線粒體被染成藍(lán)綠色，呈顆粒狀。

   2) 線粒體的光鏡切片觀察

用詹納斯綠B 染色的兔肝細(xì)胞光鏡切片，肝細(xì)胞中的線粒體呈藍(lán)綠色的顆粒。

   3) 線粒體的電鏡照片觀察

不同細(xì)胞中線粒體的形態(tài)和數(shù)目不同。線粒體的外形多樣，如圓形、橢圓形、啞鈴形和桿狀。線粒體的數(shù)目與細(xì)胞類型和細(xì)胞的生理狀態(tài)有關(guān)，線粒體多聚集在細(xì)胞生理功能旺盛的區(qū)域。線粒體脊的數(shù)目與分布方式是多種多樣的。一般與線粒體長軸垂直排列，但也可見到與線粒體長軸平行排列的脊。脊的橫切面呈囊狀或管狀。脊的數(shù)量與細(xì)胞呼吸機(jī)能的強(qiáng)度有很大關(guān)系。