實驗步驟
一、呂氏(Loeffler)堿性美藍染液
A液:美藍(methylene blue) 0.6g
95%酒精 30ml
B液:KOH 0.01g
蒸餾水 100ml
分別配制A液和B液,配好后混合即可。
二、齊氏(Ziehl)石炭酸復(fù)紅染色液
A液:堿性復(fù)紅(basic fuchsin) 0.3g
95%酒精 10ml
B液:石炭酸 5.0g
蒸餾水 95ml
將堿性復(fù)紅在研缽中研磨后,逐漸加入95%酒精,繼續(xù)研磨使其溶解,配成A液。
將石炭酸溶解于水中,配成B液。
混合A液及B液即成。通?蓪⒋嘶旌弦合♂5—10倍使用,稀釋液易變質(zhì)失效,一次不宜多配。
三、革蘭氏(Gram)染色液
1.草酸銨結(jié)晶紫染液
A液:結(jié)晶紫(crystal violet) 2g
95%酒精 20ml
B液:草酸銨(ammonium oxalate) 0.8g
蒸餾水 80ml
混合A、B二液,靜置48小時后使用。
2.盧戈氏(Lugol)碘液
碘片 1.0g
碘化鉀 2.0g
蒸餾水 300ml
先將碘化鉀溶解在少量水中,再將碘片溶解在碘化鉀溶液中,待碘全溶后,加足水分即成。
3.95%的酒精溶液。
4.番紅復(fù)染液
番紅(safranine O) 2.5g
95%酒精 100ml
取上述配好的番紅酒精溶液10ml與80ml蒸餾水混勻即成。
四、芽孢染色液
1.孔雀綠染液
孔雀綠(malachite green) 5g
蒸餾水 100ml
2.番紅水溶液
番紅 0.5g
蒸餾水 100ml
3.苯酚品紅溶液
堿性品紅 11g
無水酒精 100ml
制法取上述溶液10ml與100ml5%的苯酚溶液混合,過濾備用。
4.黑色素(nigrosin)溶液
水溶性黑色素 10g
蒸餾水 100ml
稱取10g黑色素溶于100ml蒸餾水中,置沸水浴中30分鐘后,濾紙過濾
二次,補加水到100ml,加0.5ml甲醛,備用。
五、莢膜染色液
1.黑色素水溶液
黑色素 5g
蒸餾水 100ml
福爾馬林(40%甲醛) 0.5ml
將黑色素在蒸餾水中煮沸5分鐘,然后加入福爾馬林作防腐劑。
2.番紅染液
與革蘭氏染液中番紅復(fù)染液相同。
六、鞭毛染色液
A液:單寧酸 5g
FeCl3 1.5g
蒸餾水 100ml
福爾馬林(15%) 2.0ml
NaOH(1%) 1.0ml
配好后,當(dāng)日使用,次日效果差,第三日則不宜使用。
B液:AgNO3 2g
蒸餾水 100ml
待AgNO3溶解后,取出10ml備用,向其余的90mlAgNO3中滴入濃NH4ON,使之成為很濃厚的懸浮液,再繼續(xù)滴加NH4OH,直到新形成的沉淀又重新剛剛?cè)芙鉃橹埂T賹溆玫?0mlAgNO3慢慢滴入,則出現(xiàn)薄霧,但輕輕搖動后,薄霧狀沉淀又消失,再滴入AgNO3,直到搖動后仍呈現(xiàn)輕微而穩(wěn)定的薄霧狀沉淀為止。如所呈霧不重,此染劑可使用一周,如霧重,則銀鹽沉淀出,不宜使用。
七、富爾根氏核染色液
1.席夫氏(Schiff)試劑
將1g堿性復(fù)紅加入200ml煮沸的蒸餾水中,振蕩5分鐘,冷至50℃左右過濾,再加入1mol/LHC120ml,搖勻。待冷至25℃時,加Na2S2O5(偏重亞硫酸鈉)3g,搖勻后裝在棕色瓶中,用黑紙包好,放置暗處過夜,此時試劑應(yīng)為淡黃色(如為粉紅色則不能用),再加中性活性炭過濾,濾液振蕩1分鐘后,再過濾,將此濾液置冷暗處備用(注意:過濾需在避光條件下進行)。
在整個操作過程中所用的一切器皿都需十分潔凈、干燥,以消除還原性物質(zhì)。
2.Schandium固定液
A液:飽和升汞水溶液
50ml升汞水溶液加95%酒精25ml混合即得。
B液:冰醋酸
取A液9毫升 B液1毫升,混勻后加熱至60℃。
3.亞硫酸水溶液
10%偏重亞硫酸鈉水溶液5ml,1mol/LHCl5ml,加蒸餾水100ml混合即得。
八、Bouin氏固定液
苦味酸飽和水溶液 75ml
福爾馬林(40%甲醛) 25ml
冰醋酸 5ml
1g苦味酸可制成75ml飽和水溶液。
先將苦味酸溶解成水溶液,然后再加入福爾馬林和冰醋酸搖勻即成。
九、乳酸石炭酸棉藍染色液
石炭酸 10g
乳酸(比重1.21) 10ml
甘油 20ml
蒸餾水 10ml
棉藍(cottonblue) 0.02g
將石炭酸加在蒸餾水中加熱溶解,然后加入乳酸和甘油,最后加入棉藍,使其溶解即成。
十、瑞氏(Wright)染色液
瑞氏染料粉末 0.3g
甘油 3ml
甲醇 97ml
將染料粉末置于干燥的乳缽內(nèi)研磨,先加甘油,后加甲醇,放玻璃瓶中過夜,過濾即可。
十一、美藍(Levowitz-Weber)染液 (實驗62)
在52ml95%酒精和44ml四氯乙烷的三角燒瓶中,慢慢加入0.6g氯化美藍(met hylene blue chloride),旋搖三角燒瓶,使其溶解。放5—10℃下,12—24小時,然后加入4ml冰醋酸。用質(zhì)量好的濾紙如WhatmanNo.42或與之同質(zhì)量的濾紙過濾。貯存于清潔的密閉容器內(nèi)。