羅氏FFPE 組織切片核酸純化試劑盒操作說(shuō)明
瀏覽次數(shù):6968 發(fā)布日期:2015-4-6
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High Pure FFPET DNA Isolation Kit基于離心柱法的抽提原理,免去DNA沉淀和有機(jī)試劑抽提的步驟,是快速核酸抽提的理想工具。
整個(gè)抽提過(guò)程僅需3小時(shí)(含脫蠟過(guò)程); 獲得高DNA得率和質(zhì)量; 在qPCR,芯片分析和測(cè)序等下游應(yīng)用中獲得強(qiáng)大信號(hào)。 |
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圖1:從FFPET樣本中獲得高得率的DNA
柱形圖顯示了從3種不同乳腺癌或結(jié)腸癌異種移植組織的5um FFPET組織切片樣品中獲得的DNA平均得率。通常來(lái)說(shuō),在不同組織切片的樣品個(gè)體間存在一定的DNA得率變異。
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圖2:從樣品中抽提獲得高質(zhì)量DNA,適用于多種下游應(yīng)用。 在HT29異種移植FFPET樣本中抽提獲得DNA,再進(jìn)行100,200,300,400bp片段長(zhǎng)度擴(kuò)增子的多重PCR。 泳道1和2:使用二甲苯進(jìn)行脫蠟 泳道3和4:使用十六烷進(jìn)行脫蠟 泳道5和6:多重PCR質(zhì)控對(duì)照,核酸樣品為人全血中抽提的完整基因組DNA 圖2:從近期和長(zhǎng)期保存的FFPET樣品中均可抽提獲得高RNA得率 | |
結(jié)果:所有泳道中均出現(xiàn)4個(gè)清晰的目標(biāo)條帶,表明High Pure FFPET DNA Isolation Kit能在FFPET樣本中抽提獲得高質(zhì)量DNA,適用于CGH芯片分析,二代測(cè)序等對(duì)核酸模板質(zhì)量要求高的下游應(yīng)用。 |
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圖3:從樣品中抽提獲得高質(zhì)量DNA,提高qPCR檢測(cè)靈敏度
作為qPCR實(shí)驗(yàn)中的核酸模板,要求高質(zhì)量DNA,即良好的核酸得率、純度和片段大小分布,并能高靈敏度和不偏倚地檢測(cè)到目標(biāo)基因。取5ul DNA洗脫液,分別通過(guò)LightCycler 480 Real-Time PCR Instrument擴(kuò)增檢測(cè)CycA(442bp)或myo(89bp)基因片段。 結(jié)果:High Pure FFPET DNA Isolation Kit抽提獲得的DNA樣品能在qPCR研究中獲得更高的檢測(cè)靈敏度(提前出線的Cq值)。
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圖4:將DNA應(yīng)用于甲基化敏感性高分辨率熔解曲線分析(MS-HRM)等前沿應(yīng)用
將不同腫瘤研究樣本的DNA抽提物經(jīng)重亞硫酸鹽處理,通過(guò)LightCycler 480 Instrument進(jìn)行APC基因的MS-HRM分析,不同腫瘤組織的APC基因具有不同程度的甲基化。
結(jié)果:使用High Pure FFPET DNA Isolation Kit抽提獲得的DNA是MS-HRM分析的理想模板。在該研究中,共發(fā)現(xiàn)3中不同程度的甲基化范圍:樣本A的APC甲基化水平在10-100%,樣本B的甲基化水平在0-1%,樣本C的APC不存在甲基化。 | |
產(chǎn)品信息 |
產(chǎn)品 |
目錄號(hào) |
包裝規(guī)格 |
High Pure FFPET DNA Isolation Kit |
06 650 767 001 |
50次抽提反應(yīng)。 | |
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