真核生物的基因組DNA以染色質(zhì)的形式存在,研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下的相互作用是闡明真核生物基因表達機制的基本途徑。與傳統(tǒng)的EMSA技術(shù)相比,染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(ChIP)能真實完整地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白,是目前研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的最佳方法。
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)作為最佳的研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法,它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,并將其隨機切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段段,通過對目的片斷的純化與檢測,從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。
CHIP不僅可以檢測體內(nèi)反式因子與DNA的動態(tài)作用,還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關(guān)系。而且,CHIP與其他方法的結(jié)合,擴大了其應(yīng)用范圍:CHIP與基因芯片相結(jié)合建立的CHIP-on-chip方法已廣泛用于特定反式因子靶基因的高通量篩選;CHIP與體內(nèi)足跡法相結(jié)合,用于尋找反式因子的體內(nèi)結(jié)合位點;RNA-CHIP用于研究RNA在基因表達調(diào)控中的作用。由此可見,隨著CHIP的進一步完善,它必將會在基因表達調(diào)控研究中發(fā)揮越來越重要的作用。
作為表觀遺傳學(xué)的專業(yè)解決方案供應(yīng)商,艾美捷向您推薦Epigentek品牌的最熱銷的常規(guī)的染色質(zhì)免疫試劑盒和最有特色的植物ChIP試劑盒。另外,除了成套的試劑盒外,艾美捷同樣能為您提供與ChIP試劑盒相關(guān)的ChIP級抗體,可廣泛用于包括ChIP、IHC、IF等在內(nèi)的多種實驗應(yīng)用。
性價比最高的組織染色質(zhì)免疫共沉淀試劑盒(ChIP)(p-2002)提供了對細(xì)胞樣品進行染色質(zhì)免疫沉淀反應(yīng)所需的所有試劑。并且本試劑盒中含有一種陽性對照抗體(RNA聚合酶II抗體)、一種陰性對照抗體(正常小鼠的IgG)、GAPDH引物(可以作為陽性對照來保證試劑盒中試劑和操作步驟沒出現(xiàn)問題)。在大多數(shù)生長期的哺乳動物細(xì)胞中,RNA聚合酶II會在GAPDH基因啟動子上富集,準(zhǔn)備起始轉(zhuǎn)錄,因此該啟動子能與RNA聚合酶II發(fā)生免疫沉淀反應(yīng),而不能與正常小鼠IgG發(fā)生。在本染色質(zhì)免疫沉淀反應(yīng)中,細(xì)胞耦合了甲醛,提取出其中的染色質(zhì)。染色質(zhì)進行適當(dāng)?shù)拇驍,然后加入到微孔中與其表面上吸附的抗體發(fā)生免疫反應(yīng)。特異性結(jié)合到微孔上的DNA從抗體-捕獲蛋白-DNA復(fù)合物上釋放出來,翻轉(zhuǎn)后,通過本公司專門設(shè)計的高速離心柱純化。洗脫下來的DNA可直接用于隨后的各種分析。本試劑盒是基于96孔板的,市場上同類產(chǎn)品中最快捷的試劑盒,對CHIP過程進行了徹底的簡化,操作簡捷,方便易學(xué)整個處理過程不到5小時,同時可拆卸式的96孔板模式使研究人員能根據(jù)自己需要選擇手工或是高通量分析。
(左圖為ChIP試劑盒(p-2002)簡單便捷的實驗流程)(右圖為ChIP試劑盒(p-2002)卓越性能)
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