細胞技術專題：細胞融合實驗
簽： 細胞 融合
細胞融合（Cell fusion），即在自然條件下或用人工方法（生物的、物理的、化學的）使兩個或兩個以上的細胞合并形成一個細胞的過程。人工誘導的細胞融合，在六十年代作為一門新興技術而發(fā)展起來。
實驗方法
- 聚乙二醇法
| 實驗方法原理 | 細胞融合的誘導物種類很多．常用的主要有滅活的仙臺病毒(Sendaivirus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和電脈沖。目前應用最廣泛的是聚乙二醇，因為它易得、簡便，且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機制尚不完全清楚，它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發(fā)生結構重排。 |
|---|---|
| 實驗材料 |
雞紅細胞 |
| 試劑、試劑盒 |
PEG Hanks液 |
| 儀器、耗材 |
顯微鏡 離心機 水浴箱 離心管 試管 載玻璃片 蓋玻片 |
| 實驗步驟 |
1. 取新鮮雞血以0.85%生理鹽水制成10%的懸液。
2. 稱取0.5克PEG（MW=4 000）放入試管內(nèi)，在酒精燈上融化之，迅速加入0.5 ml 預熱的Hanks液混勻制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。 3. 取上述10%的雞紅細胞懸液1 ml 放入離心管中，再加入5 ml Hanks液混勻，然后以1 000 rpm 離心5分鐘，小心棄去上清，用指彈法將細胞團塊彈散。 4. 取上述50%PEG溶液0.5 ml，在1分鐘內(nèi)滴加到雞紅細胞懸液，邊加邊輕輕搖動混勻。待PEG全部加入后靜置1分鐘左右。此全部過程都要求在37℃水浴內(nèi)進行。 5. 緩慢滴加9 ml Hanks液以終止PEG的作用，在37℃水浴內(nèi)靜置5分鐘。 6. 離心棄上清后，取一滴融合后的細胞懸液滴片，加蓋片鏡檢。 7. 結果觀察：在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細胞膜融合在一起，形成一個異核體細胞。要注意辨別融合細胞與重疊的雞紅細胞。 8. 融合率的計算：在高倍鏡下隨機計數(shù)200個細胞（包括融合的與未融合的細胞），以融合細胞（含兩個或兩個以上的細胞核的細胞）的細胞核數(shù)除以總細胞核數(shù)（包括融合與未融合的細胞核）即得出融合率。公式如下：  |
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