細(xì)胞技術(shù)專題：細(xì)胞生長曲線實(shí)驗(yàn)

瀏覽次數(shù)：1413　發(fā)布日期：2014-4-17　來源：上海北諾生物科技有限公司

標(biāo)簽：細(xì)胞生長曲線

細(xì)胞生長曲線是測定細(xì)胞絕對(duì)生長數(shù)的常用方法，是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)。一般細(xì)胞傳代之后，經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁，隨后度過長短不同的潛伏期，即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長期。為了準(zhǔn)確描述整個(gè)過程中細(xì)胞數(shù)目的動(dòng)態(tài)變化，典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期，斜率較大的指數(shù)生長期，呈平臺(tái)狀的平頂期及退化衰亡4個(gè)部分。

實(shí)驗(yàn)方法

細(xì)胞生長曲線

實(shí)驗(yàn)方法原理	細(xì)胞生長曲線是觀察細(xì)胞生長基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定生長特性的細(xì)胞才適合在觀察細(xì)胞生長變化的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。因而在細(xì)胞系細(xì)胞和非建系細(xì)胞生長特性觀察中，生長曲線的測定是最為基本的指標(biāo)。細(xì)胞生長曲線的測定一般可利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)材料	細(xì)胞
試劑、試劑盒	D-Hanks液牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶
儀器、耗材	凈化工作臺(tái) 離心機(jī) 恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡培養(yǎng)箱吸管培養(yǎng)瓶吸頭槍頭 24培養(yǎng)板膠塞微量加樣槍紅血球計(jì)數(shù)板
實(shí)驗(yàn)步驟	1. 取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞，采用一般傳代方法進(jìn)行消化，制成細(xì)胞懸液。 2. 計(jì)數(shù)，精確地將細(xì)胞分別接種于21～30個(gè)大小一致的培養(yǎng)瓶內(nèi)或培養(yǎng)孔（以24孔培養(yǎng)板為宜），每瓶或孔細(xì)胞總數(shù)要求一致，加入培養(yǎng)液的量也要一致。 3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算均值。培養(yǎng)3～5 d 常要給未計(jì)數(shù)的細(xì)胞換液。 4. 以培養(yǎng)時(shí)間為橫軸，細(xì)胞數(shù)為縱軸（對(duì)數(shù)），描繪在半對(duì)數(shù)座標(biāo)紙上，連接成曲線后即成該細(xì)胞的生長曲線。展開
注意事項(xiàng)	1. 細(xì)胞生長曲線雖然最為常用，但有時(shí)其反映數(shù)值不夠精確，可有20～30%的誤差，需結(jié)合其它指標(biāo)進(jìn)行分析。 2. 現(xiàn)在很多實(shí)驗(yàn)室利用培養(yǎng)板采用MTT法進(jìn)行生長曲線測定，較為簡便。 3. 標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞生長曲線近似“S”形，一般在傳代后第一天細(xì)胞數(shù)有所減少，再經(jīng)過幾天的潛伏適應(yīng)期，然后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，達(dá)到平臺(tái)期后生長穩(wěn)定，最后到達(dá)衰老。 4. 在生長曲線上細(xì)胞數(shù)量增加1倍時(shí)間稱為細(xì)胞倍增時(shí)間，可以從曲線上換算出。

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