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PAGE凝膠快速銀染試劑盒操作手冊(cè)

瀏覽次數(shù):2441 發(fā)布日期:2014-4-1  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
PAGE凝膠快速銀染試劑盒
貨號(hào): G7210
規(guī)格: 1L
保存: 室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12個(gè)月。
試劑盒內(nèi)容: G7210
硝酸銀 2g
染色液A 100ml
顯色液B 100ml
顯色液C 100ml
終止液D 100ml
注:1L 規(guī)格指可配制的硝酸銀染色液的體積,實(shí)際使用次數(shù)根據(jù)PAGE 膠大小不同而不同。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
核酸銀染的原理是銀離子可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物,然后用還原劑如甲醛在堿性環(huán)境下使Ag+還原成銀
顆粒,可把核酸電泳帶染成黑褐色。它主要用于聚凝膠電泳染色。其靈敏度比EB 高200 倍,該產(chǎn)品
整個(gè)過(guò)程只需要20 分鐘,操作簡(jiǎn)單,靈敏度高,能檢測(cè)到10ng 以下的DNA 條帶。
操作步驟:
一、染色液配制
需要配制的染色液體積根據(jù)PAGE 膠的大小而定,一般的mini-PAGE 膠需要20-30mL。配制用的器皿清洗
干凈后用去離子水涮洗,染色液須用去離子水配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。如果配制的溶液體積不是100mL,可以按比例
改變各成分用量。
1,硝酸銀染液:稱取0.2g 硝酸銀,加入到90ml 去離子水中徹底溶解,加入10ml 溶液A 混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
2,顯色液:分別取溶液B 和溶液C 各10ml 加入80ml 去離子水中混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
3,終止液:取終止液D 10ml 加去離子水稀釋至100ml,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二、染色:
1,PAGE 電泳結(jié)束后,將PAGE 蛋白膠轉(zhuǎn)移至玻璃平皿或搪瓷盤(pán)中,用去離子水漂洗兩遍,每次2min。
2,將PAGE 膠轉(zhuǎn)移至硝酸銀染液中,使染液沒(méi)過(guò)PAGE 膠,室溫染色10min?芍糜趽u床上緩慢搖晃,使
其染色均勻。
3,棄去染色液,用去離子水快速漂洗三次,每次半分鐘。
4,將PAGE 膠轉(zhuǎn)移至顯色液中,使顯色液沒(méi)過(guò)PAGE 膠,室溫?fù)u晃顯色至條帶清晰可見(jiàn)。
5,可選,將PAGE 膠轉(zhuǎn)移至終止液中,終止顯色1min。
6,銀染后PAGE 膠可拍照保存或用于后續(xù)試驗(yàn)。
注意事項(xiàng):
1. 銀染主要出現(xiàn)在PAGE 膠的表面,使用薄膠(0.5-0.75mm)可以提高靈敏度。
2. 對(duì)于考馬斯亮藍(lán)染色的SDS-PAGE 膠,可用甲醇將膠漂洗后,繼續(xù)進(jìn)行銀染?既具^(guò)程中的乙酸會(huì)干
Solarbio
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd
Tel: 010-56371207
Fax: 010-56371281/82
Http://www.solarbio.cn
擾銀染,因此要確保將PAGE 凝膠中殘留的乙酸徹底洗凈。
3. 不同蛋白質(zhì)對(duì)銀染的反應(yīng)是不一樣的,尤其是堿性蛋白染色效果差。因此,不宜用銀染測(cè)定不同蛋白
的比例。
4. 染色過(guò)程中,緩慢的振蕩是必要的,一般選擇40-60 rpm.
5. 凝膠表面的裂紋多是由于壓力、手印及表面干燥所致,所以全程中都應(yīng)帶手套操作。
6. PAGE 凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質(zhì)引起的,所以溶液的配制應(yīng)使用電導(dǎo)率小于1 μS 的去離
子水。
7. 如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現(xiàn)在凝膠表面,可能是在幾步漂洗過(guò)程中洗得不夠
徹底,或是染色過(guò)程時(shí)溫度太低。
8. 較深的銀染背景多是中的雜質(zhì)所致。
9. PAGE 膠中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100 和兩性電解質(zhì)這些物質(zhì)會(huì)干擾銀染。
10. 室溫操作時(shí),溫度的波動(dòng)往往會(huì)干擾銀染的效果,恒溫水浴可以解決這個(gè)問(wèn)題。
11. 憑借戊二醛預(yù)處理可以使各種蛋白質(zhì)的染色提高40 倍。
12. 染色使用的玻璃器皿必須非常干凈,用酸浸泡可以滿足要求。
13. 銀染應(yīng)盡快照相,隨著時(shí)間延長(zhǎng),蛋白條帶會(huì)變淺,而背景會(huì)加深。
14. 銀染容器最理想的是玻璃平皿,其次是搪瓷盤(pán)和密胺塑料盤(pán)等。
相關(guān)產(chǎn)品:
P1305 考馬斯亮藍(lán)染色液
P1300-500 考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液
P0012 10×麗春紅染色液
PR1400 低分子量蛋白MARKER
PR1700 預(yù)染次高分子量蛋白MARKER
P1300 SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
來(lái)源:北京索萊寶科技有限公司
聯(lián)系電話:010-50973127
E-mail:2079931930@qq.com

標(biāo)簽: 銀染試劑盒
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