光學(xué)顯微鏡檢測腫瘤細胞形態(tài)可以:(1)輔助判斷腫瘤細胞是否凋亡;(2)用于病理檢查;(3)提取腫瘤細胞微細結(jié)構(gòu)信息。
實驗方法原理 |
吉姆薩染液由天青,伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。
1)嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì),與酸性染料伊紅結(jié)果,染粉紅色,稱為嗜酸性物質(zhì);
2)細胞核蛋白和淋巴細胞 胞漿為酸性,與堿性染料美藍或天青結(jié)合,染紫藍色,稱為嗜堿性物質(zhì);
3)中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍均可結(jié)合,染淡紫色,稱為中性物質(zhì)。
PH對細胞染色有影響。細胞各種成分均分布蛋白質(zhì),由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液PH而定,在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多,易與伊紅結(jié)合,染色偏紅;在偏堿性環(huán)境中負電荷增多,易與美藍或天青結(jié)合,染色 偏藍。因此細胞染色對氫離子濃度十分敏感,染色用玻片必須清潔,無酸堿污染。配制必須用優(yōu)質(zhì)甲醇,稀釋染色必須用緩沖液,沖洗用水應(yīng)近中性,否則可導(dǎo)致各種細胞染色反應(yīng)異常,以致識別困難,甚至造成錯誤。
用途:適合大多數(shù)細胞組織的染色,包括血涂片、各種組織石蠟切片、冰凍切片、以及各種培養(yǎng)細胞。染色體顯帶、多種微生物的鑒別染色和細胞凋亡的檢測等。 |
---|---|
實驗材料 |
腫瘤細胞 |
試劑、試劑盒 |
甲醛 二甲苯 Gimsa染液 Sorensen磷酸緩沖液 香柏油 蒸餾水 |
儀器、耗材 |
光學(xué)顯微鏡 樹膠 載玻片 蓋玻片 洗瓶 離心機 離心管 |
實驗步驟 |
一、試劑配制
1. 瑞氏染液配制
稱瑞氏染料0.1 g于研缽,少量多次加入AR級甲醇至完全溶解,后補充至60 ml棕色瓶密封保存,可加3 ml甘油防止揮發(fā)。
2. 吉姆薩染液配制
0.1 g吉姆薩染料放入有6.6 ml甘油的圓錐燒瓶內(nèi),56度,水浴90-120 min,當染料與甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇,充分搖勻后過濾,棕色瓶室溫可保存一周。
二、染色
1. 收集細胞制成懸液后涂片、晾干。懸浮培養(yǎng)細胞離心收集。貼壁細胞可直接培養(yǎng)在載玻片上。組織取材需機械零散。 2. 固定:以甲醇固定10 min. 3. 液化精液2 000/ rmin 離心10 min,等滲鹽水洗3遍,涂片后自然干燥。
4. 臨用前,瑞、吉染液按10:1混合,染色30-60 s。
5. 加等量PBS(pH6.9),再染10 min。
6. 自來水沖洗,自然干燥后,即可鏡檢,也可直接香柏油兼做透明與封片。 |