一、實驗材料準(zhǔn)備
 

1.  動物：小鼠。
 

2.  試劑：DMEM(含血清)、無血清DMEM培養(yǎng)基、胰酶、PBS。
 

3.   器械：飯盒、紗布、小剪子、小鑷子、大鑷子、大燒杯、平皿、研磨玻片、濾網(wǎng)、離心管(15/50 ml)、6孔培養(yǎng)板、吸管、移液管、手套、微量加樣器。
 

4.  準(zhǔn)備：酒精擦拭臺面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風(fēng)機(jī)吹至實驗結(jié)束。
 

二、方法
 

1.   將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。
 

2.   剔除脂肪、結(jié)締組織、血液等雜物，轉(zhuǎn)移到另一個盛有PBS液的平皿中。
 

2.3 用手術(shù)剪將臟器剪成小塊(大小約1mm²)，玻片研磨，轉(zhuǎn)到離心管，離心(1 000 rpm，5 min)。
 

4.  視組織或細(xì)胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細(xì)胞分離。
 

5.   加入3-5 ml含血清的培養(yǎng)液以中止胰酶消化作用。
 

6.   用100目孔徑濾網(wǎng)濾過，除去未消化的大組織塊。
 

7.   再次離心5 min，棄上清液。
 

8.   加入無血清培養(yǎng)液5 ml，沖散細(xì)胞，再離心一次，棄上清液。
 

9.  加入含血清的培養(yǎng)液1-2 ml(視細(xì)胞量)，血球計數(shù)板計數(shù)。
 

10.   將細(xì)胞調(diào)整到5×10⁵/ml左右，轉(zhuǎn)移至6孔培養(yǎng)板中，37℃下培養(yǎng)