一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備


1.  將孕鼠或新生小鼠拉頸椎致死，置75%酒精泡2-3秒鐘（時間不能過長、以免酒精從口和肛門浸入體內(nèi)）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠帶入超凈臺內(nèi)（或?qū)⑿律�小鼠在超凈臺內(nèi)）解剖取肝臟，置平皿中。

 

2.  用Hank’s液洗滌三次，并剔除脂肪，結(jié)締組織，血液等雜物。

 

3.  用手術(shù)剪將肝臟剪成小塊（1 mm²），再用Hank’s液洗三次，轉(zhuǎn)移至小青霉素瓶中。

 

4.  視組織塊量加入5-6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20-40分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細(xì)胞分離。

 

5.  加入3-5 ml培養(yǎng)液以終止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制劑）。

 

6.  靜置5-10分鐘，使未分散的組織塊下沉，取懸液加入到離心管中。

 

7.  1 000 rpm，離心10分鐘，棄上清液。

 

8.  加入Hank’s液5 ml，沖散細(xì)胞，再離心一次，棄上清液。

 

9.  加入培養(yǎng)液1-2 ml（視細(xì)胞量），血球計數(shù)板計數(shù)。

 

10.  將細(xì)胞調(diào)整到5×10⁵/ml左右，轉(zhuǎn)移至25 ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，37℃下培養(yǎng)。