感受態(tài)專題：感受態(tài)細胞的制備及溶液配制
實驗試劑
LB培養(yǎng)基，KB培養(yǎng)基，10%甘油，液氮，0.1M CaC12 溶液
實驗設備
超凈工作臺，搖床，離心機，250mL離心瓶，0. 5mL的離心管
實驗材料
實驗步驟
2) 接種單克隆于5-10mL液體培養(yǎng)基，37℃ (大腸桿菌)或者28℃ (農(nóng)桿菌和假單胞桿菌)培養(yǎng)過夜。
4) 將菌液裝入250mL離心瓶中，冰上放置30分鐘后，4℃ 離心15分鐘。
5) 棄上清，加入200mL 10%甘油，于冰上緩慢將菌搖散，4℃ 離心15分鐘。
6) 重復前一步驟2-3次，最后棄上清，加入少量10%甘油重懸細菌。
7) 分裝于0. 5mL的離心管中，每管40ul，液氮速凍，-80℃ 存放。
1) 挑取E.coli BL21單克隆接種到5mL LB培養(yǎng)液中，37℃ 振蕩培養(yǎng)過夜。
2) 按照1:100-1:500轉(zhuǎn)接到500-1000mL液體培養(yǎng)基，37℃ 培養(yǎng)3-4小時至細菌達到對數(shù)生長期。
3) 將菌液裝入250mL離心瓶中，冰上放置30分鐘后，4℃ 離心15分鐘。
4) 棄上清，加20mL預冷的0.1M CaC12 溶液輕輕懸浮菌體，冰上放置15-30分鐘后于4℃ 離心5分鐘。
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