1.  在6孔板中接種1~3×105細胞/孔，加入2ml完全培養(yǎng)基，置CO2孵箱中37℃培養(yǎng)過夜。

 

2.  待細胞長到50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：

 

i.  溶液A：將4?g待轉(zhuǎn)染的超純DNA稀釋到250?l無血清培養(yǎng)基中，靜置5min

ii.  溶液B：將2-25?l LipofectAMINE 稀釋到250?l無血清培養(yǎng)基中，靜置5min

 

3.  混合溶液A和B，輕輕混勻，室溫放置15-45min。

 

4.  用2ml無血清培養(yǎng)基輕輕洗滌細胞，加入0.8ml無血清培養(yǎng)基/孔，將脂質(zhì)體復(fù)合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。

 

5.  用完全培養(yǎng)基替換轉(zhuǎn)染液，繼續(xù)培養(yǎng)。

 

6.  24-72hr后檢測蛋白質(zhì)的表達或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩(wěn)定表達株。