材料和試劑

1. 恒溫旋轉(zhuǎn)式搖床

2. 三角燒瓶（容量為1或2L）

3. 50ml滅菌離心管

4. 低溫高速離心機(jī)

5. SB培養(yǎng)基

細(xì)菌培養(yǎng)用胰化蛋白胨     20g
       細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物      5g
       NaCl                     0.5g
       去離子水                 950ml
       250mmol/L KCl溶液        10ml

以5N的NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.0，加去離子水至1L，高壓蒸氣滅菌。

6. 20%葡萄糖溶液

7. 1mol/L MgCl₂溶液

8. 10%甘油

操作步驟

1. 從新鮮的LB平板培養(yǎng)物中挑選一個(gè)TG1克隆，接種于10m1 SB培養(yǎng)基中。

2. 37℃搖床培養(yǎng)過夜。

3. 取2.5ml培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于0.5L SB中，另添加10ml 20%葡萄糖和5ml 1mol/L MgCl₂。

4. 37℃培養(yǎng)直到OD600=0.7～0.8。

5. 將培養(yǎng)物置于冰浴15min，然后4000r/min于4℃離心20min，棄上清。

6. 將菌體重懸于1/2體積的預(yù)冷10%甘油中，4000r/min于4℃離心20min，棄上清。

7. 重復(fù)第（6）步驟。

8. 將菌體重懸于15ml 10%甘油，并轉(zhuǎn)移至一支50ml的離心管中。3500r/min于4℃離心15min。小心地去掉上清，得到4～5ml細(xì)菌。迅速地將其吹打重懸；

9. 分裝成200μl或40μl 的小份，操作應(yīng)在乙醇/干冰浴中進(jìn)行。貯存于-70℃。

10. 用pUC19質(zhì)粒測(cè)試制備感受態(tài)細(xì)菌的轉(zhuǎn)化效率，應(yīng)達(dá)到10⁹cfu/μg DNA。