2.  對(duì)于懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

（1）300 g 離心5 min，棄上請(qǐng)。

（2）細(xì)胞以1/2原體積的冰冷重懸，再離心后棄上清。

 

3.  重懸細(xì)胞于375 μl  冰冷的細(xì)胞裂解緩沖液，并置冰浴5 min。

4.  于4℃在微量離心機(jī)中離心2 min，將上清移至一個(gè)潔凈的已加有5 μl 20%SDS的管中，立即在旋渦混合器上振蕩。

 

5.  加入2.5 μl 20 mg/ml 蛋白酶K，37℃溫育15 min。

 

6.  加入400 μl 酚/氯仿/異戊醇抽提，在旋渦混合器上振蕩用微量離心機(jī)離心，上清移至干凈的離心管中，重復(fù)抽提1遍。

7.  再以400 μl 氯仿/異戊醇抽棰，上層水相轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中。

8.  加入40 μl 3 mol/l 乙酸鈉緩沖液（pH7.5），再加無(wú)水乙醇，混勻后在干冰/乙醇中沉淀15~30 min或-20℃過(guò)夜。

 

9.  用微量離心機(jī)4℃離心15 min 加人1 ml 75%乙醇/25% 0.1 mol/l乙酸鈉（pH5.2）冼滌沉淀。

10.  干燥后用100 μl 處理過(guò)的水重溶沉淀，取10 μl RNA稀釋于1 ml 水中，測(cè)A₂₈₀和A₂₆₀，其與的RNA可在-70℃貯存。