產(chǎn)品介紹
本試劑盒提供了從各種來源的土壤中快速簡(jiǎn)便的提取基因組DNA的方法。土壤樣品中存在大量的抑制因子如腐殖酸、金屬離子等,這些物質(zhì)即使微量存在于純化后的DNA中也會(huì)對(duì)下游反應(yīng),如對(duì)PCR、限制性酶切等產(chǎn)生影響。因而純化土壤DNA的關(guān)鍵在于如何有效的去除土壤中的抑制因子。
采用本公司特有的DNA-only硅膠膜離心柱和溶液配方,搭配Foregene Protease,可以有效的去除土壤中各種抑制因子,無需有機(jī)溶劑抽提或乙醇及異丙醇沉淀,在90分鐘內(nèi)即可完成對(duì)土壤樣品中DNA的提取操作。
產(chǎn)品特點(diǎn)
無RNA酶污染:無需額外添加RNA酶即可去除基因組DNA中的RNA,避免實(shí)驗(yàn)室遭受外源RNA酶污染。
速度快:操作簡(jiǎn)單,土壤基因組DNA提取操作在90分鐘內(nèi)即可完成。
方 便:離心操作均在常溫,無需4℃低溫離心或乙醇沉淀DNA。
安 全:無需有機(jī)試劑抽提。
質(zhì)量高:提取獲得的基因組DNA片段大、無RNA、無RNA酶、離子含量極低,能滿足各種實(shí)驗(yàn)的要求。
操作步驟
使用前請(qǐng)先在Buffer WB中加入無水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。
1. 稱取0.5g土壤樣品,置于2ml離心管中。 注意:如果樣本是懸濁液,可13,300rpm(17,000×g)離心1min,收集沉淀后再稱取0.5g置于2ml離心管中。
2. 向離心管中加入1ml Buffer TE、100μl Lysozyme(配制方法見第五頁)充分混勻后,37℃搖床溫浴30min(轉(zhuǎn)速:180rpm/min)。
3. 7,200rpm(~5,000×g)離心5min(離心轉(zhuǎn)速有多大影響),用移液器吸除上清。 注意:應(yīng)盡量吸凈殘留上清,以免影響后續(xù)操作。
4. 向留有沉淀的離心管中加入600μl BufferSG1,上下顛倒充分混勻,加入50μl Foregene Protease,50μl Buffer SG2,渦旋充分混勻。 注意:使用前請(qǐng)檢查Buffer SG2是否有沉淀產(chǎn)生,如有沉淀產(chǎn)生,請(qǐng)將溶液置于65℃溫育,直至沉淀溶解后使用。
5. 將離心管置于65℃水浴或金屬浴30min,其間每隔10min上下顛倒充分混勻一次。
6. 向離心管中加入 600μl Buffer SG3,上下顛倒充分混勻,置于65℃水浴或金屬浴10min,其間每隔4min上下顛倒充分混勻一次。
7. 12,000rpm(~13,400×g)離心5min,用移液器將上清液轉(zhuǎn)移至新的2ml離心管中,應(yīng)避免吸到沉淀。
8. 向離心管中加入20μl Buffer SG4,280μl乙醇(96-100%)渦旋充分混勻10s,可以瞬時(shí)離心收集附著在管蓋和管壁的液滴。
9. 將離心柱放入收集管中,取800μl混合液加入離心柱中,12,000rpm(~13,400×g),離心1min。
10. 倒掉收集管中廢液,將離心柱放回收集管中,將剩余混合液全部加入離心柱中,12,000rpm(~13,400×g),離心1min。
11. 倒掉收集管中的廢液,將離心柱放回收集管中,向離心柱中加入500μl Buffer PW,12,000rpm(~13,400×g),離心1min。
12. 倒掉收集管中的廢液,將離心柱放回收集管中,向離心柱中加入700μl Buffer WB,12,000rpm(~13,400×g),離心1min。
13. 重復(fù)步驟12一次。
14. 倒掉收集管中的廢液,將離心柱放回收集管中, 12,000rpm(~13,400×g)離心1min。
15. 將離心柱轉(zhuǎn)移至新的2ml 離心管中,向膜中央懸空滴加100μl 已于65℃預(yù)熱的Buffer EB,室溫放置5min,12,000rpm(~13,400×g) 離心1min。再次向膜中央懸空滴加100μl 已預(yù)熱的Buffer EB,12,000rpm(~13,400×g) 離心1min。將兩次收集的洗脫液合并。
注意:如果希望提高DNA的濃度,可將第1次離心得到的溶液重新加回離心柱中,12,000rpm (~13,400×g) 離心1min。