微量基因組DNA提取試劑盒說明書
產(chǎn)品介紹
本試劑盒提供了高效、快速從各種微量生物樣本中純化得到較高濃度基因組DNA的方法，例如：微量血液、細胞、動物組織、干燥血跡、臨床棉簽、毛囊等。采用本公司特有的DNA-only硅膠膜離心柱和配方，搭配Foregene Protease，可以在20-80分鐘提取到較高濃度、高質(zhì)量的基因組DNA。專門設計的微小純化柱結合基因組DNA，可用微量（15μl）洗脫液洗脫DNA，提高獲得的基因組DNA的濃度，便于下游檢測或?qū)嶒�。試劑盒一次可處理一個或多個樣品，且純化過程不需要用到酚、氯仿等有機物抽提以及耗時的異丙醇或乙醇沉淀，操作簡捷省時。
產(chǎn)品特點
無RNA酶污染：無需額外添加RNA酶即可去除基因組DNA中的RNA，避免實驗室遭受外源RNA酶污染。
速度快：Foregene Protease具有比同類蛋白酶更高的活性，消化組織樣本速度快；操作簡單，基因組DNA提取操作在20-80分鐘內(nèi)即可完成。
方 便：離心操作均在常溫，無需4℃低溫離心或乙醇沉淀DNA。
安 全：無需有機試劑抽提。
質(zhì)量高：提取獲得的基因組DNA片段大、無RNA、無RNA酶、離子含量極低，能滿足各種實驗的要求。
微量洗脫體系：可以提高基因組DNA濃度，便于下游檢測或?qū)嶒灐?/FONT>
一、從微量抗凝血液中提取基因組DNA
使用前請先在Buffer WB中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。
1. 取1-100μl抗凝血液到1.5ml離心管中。
2. 不足100μl的血液樣本加Buffer ST1補足到100μl。
3. 加入10μl Foregene Protease，渦旋混勻。
4. 加入100μl Buffer ST2，輕輕顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋及內(nèi)壁的液滴。
5. 將離心管放置于65℃金屬浴或水浴中10min，每間隔3min輕搖混勻一次。
6. 將混合液全部轉(zhuǎn)移至離心柱中，12,000rpm(~13,400×g) 離心1min，棄掉收集管中的廢液。
7. 將離心柱放回收集管中，向離心柱中加入500μl Buffer PW，12,000rpm(~13,400×g)離心1min，棄掉收集管中的廢液。
8. 將離心柱放回收集管中，向離心柱中加入700μl Buffer WB，12,000rpm(~13,400×g)離心1min，棄掉收集管中的廢液。
9. 重復步驟8一次。
10. 將離心柱放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g) 空管離心1min。
11. 將離心柱轉(zhuǎn)移至新的1.5ml 離心管中，向膜中央懸空滴加15-100μl 已于65℃預熱的Buffer EB，室溫放置5min，12,000rpm(~13,400×g) 離心1min。
注意：Buffer EB的體積不應少于15μl，在推薦洗脫體積范圍內(nèi)，適當增加Buffer EB體積，可提高DNA得率。如果希望提高DNA的濃度，可將第1次離心得到的溶液重新加回離心柱中，12,000rpm (~13,400×g) 離心1min。
二、從漱口水中提取基因組DNA
使用前請先在Buffer WB中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。
1. 在50ml無菌管中添加10-20ml漱口水樣品，1800×g離心5min，將上清小心倒掉或用移液器小心吸除上清液。
2. 向沉淀中加入180μl Buffer ST1，重懸沉淀，將全部懸液轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中。
3. 加入20μl Foregene Protease，渦旋混勻。瞬時離心以收集附著在管蓋及內(nèi)壁的液體。
4. 將離心管放置于65℃金屬浴或水浴中30-60 min，其間每間隔15min渦旋混勻一次（或用手指用力彈擊離心管底部數(shù)次）以幫助細胞酶解。
5. 加入200μl Buffer ST2，渦旋混勻，瞬時離心以收集附著在管蓋及內(nèi)壁的液體。
6. 將離心管放置于65℃金屬浴或水浴中10min，其間每間隔3min渦旋混勻一次。
7. 將所得混合液全部轉(zhuǎn)移至離心柱中，12,000rpm(~13,400×g) 離心1min，棄掉收集管中的廢液。
8. 將離心柱放回收集管中，向離心柱中加入500μl Buffer PW，12,000rpm(~13,400×g)離心1min，棄掉收集管中的廢液。
9. 將離心柱放回收集管中，向離心柱中加入700μl Buffer WB，12,000rpm(~13,400×g)離心1min，棄掉收集管中的廢液。
10. 重復步驟9一次。
11. 將離心柱放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g) 空管離心1min。
12. 將離心柱轉(zhuǎn)移至新的1.5ml 離心管中，向膜中央懸空滴加15-100μl 已于65℃預熱的Buffer EB，室溫放置5min，12,000rpm(~13,400×g) 離心1min。
注意：Buffer EB的體積不應少于15μl，在推薦洗脫體積范圍內(nèi)，適當增加Buffer EB體積，可提高DNA得率。如果希望提高DNA的濃度，可將第1次離心得到的溶液重新加回離心柱中，12,000rpm (~13,400×g) 離心1min。
三、從毛囊中提取基因組DNA
使用前請先在Buffer WB中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。需提前準備1M DTT溶液。
1. 取1根含毛囊的毛發(fā)：在1.5ml離心管中加入250μl Buffer ST1，20μl Foregene Protease，20μl 1M DTT，混勻。從毛發(fā)根部毛囊處取1cm長的一段，與上述溶液渦旋混勻。
2. 將離心管放置于65℃金屬浴或水浴中1hr，其間每間隔15min渦旋混勻一次；或者置于水浴振蕩儀中消化，消化至毛發(fā)斷裂為小段或發(fā)生卷曲即可。瞬時離心以收集附著在管壁及管蓋的液體。 注意：裂解時間根據(jù)樣本不同有所差異，一般毛發(fā)需要40-60min。羽莖樣本不會完全酶解，對于未酶解完全的羽莖樣本，可以直接以12,000rpm(~13,400×g)離心5min，取上清液進行后續(xù)實驗。
3. 加入300μl Buffer ST2，渦旋混勻，瞬時離心以收集附著在管壁及管蓋的液體。
4. 將離心管放置于65℃金屬浴或水浴中10min，每間隔3min渦旋混勻一次。
5. 將所得混合液全部轉(zhuǎn)移至離心柱中，12,000rpm(~13,400×g) 離心1min，棄掉收集管中的廢液。
6. 將離心柱放回收集管中，向離心柱中加入500μl Buffer PW，12,000rpm(~13,400×g)離心1min，棄掉收集管中的廢液。
7. 將離心柱放回收集管中，向離心柱中加入700μl Buffer WB，12,000rpm(~13,400×g)離心1min，棄掉收集管中的廢液。
8. 重復步驟7一次。
9. 將離心柱放回收集管中，12,000rpm(~13,400×g) 空管離心1min。
10. 將離心柱轉(zhuǎn)移至新的1.5ml 離心管中，向膜中央懸空滴加15-100μl 已于65℃預熱的Buffer EB，室溫放置5min，12,000rpm(~13,400×g) 離心1min。
注意：Buffer EB的體積不應少于15μl，在推薦洗脫體積范圍內(nèi)，適當增加Buffer EB體積，可提高DNA得率。如果希望提高DNA的濃度，可將第1次離心得到的溶液重新加回離心柱中，12,000rpm (~13,400×g) 離心1min。
