轉(zhuǎn)染試劑：Roche[選購(gòu)寶典]

現(xiàn)轉(zhuǎn)染市場(chǎng)多個(gè)新產(chǎn)品涌現(xiàn)而出，一些舊產(chǎn)品更弦易主。一提起羅氏的轉(zhuǎn)染試劑，大家肯定立馬想到Fugene 6/HD。

即使Fugene 6/HD不在手，羅氏也毫不畏懼，因?yàn)樗�集合二十年的轉(zhuǎn)染經(jīng)驗(yàn)，推出了X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP轉(zhuǎn)染試劑。X-tremeGENE 9試劑為多種常用的細(xì)胞系帶來(lái)了高效的性能，而X-tremeGENE HP試劑則更適合于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，比如原代細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞。這兩款試劑還有一點(diǎn)與Fugene很相似，那就是對(duì)細(xì)胞溫和。

X-tremeGENE 9 & X-tremeGENE HP

這兩款試劑都綜合了低的細(xì)胞毒性和高的轉(zhuǎn)染效率，讓更多細(xì)胞存活，且?guī)��?lái)生理上更相關(guān)的結(jié)果。而且，轉(zhuǎn)染步驟也相當(dāng)簡(jiǎn)單：只需用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋轉(zhuǎn)染試劑，與質(zhì)粒共同孵育，然后逐滴加入細(xì)胞中。研究人員所需的優(yōu)化極少，當(dāng)然，在轉(zhuǎn)染之前，你還是得優(yōu)化轉(zhuǎn)染試劑與DNA的比例。建議的比例是3:1，但對(duì)于特定研究，2:1至7:1的比例可能會(huì)提高轉(zhuǎn)染效率。

此外，X-tremeGENE HP試劑還經(jīng)過(guò)0.2 μm孔徑的膜過(guò)濾，無(wú)動(dòng)物來(lái)源成分，在血清中也有活性。它與核酸形成復(fù)合物，促進(jìn)高效的DNA轉(zhuǎn)移，而帶來(lái)的生理和形態(tài)學(xué)改變極少。它非常適合細(xì)胞分析和蛋白表達(dá)研究。

如何選擇這兩款試劑，請(qǐng)看下表。如果轉(zhuǎn)染HeLa、HEK-293等普通細(xì)胞系，這兩個(gè)都能勝任。至于那些難搞定的細(xì)胞，則最好選擇X-tremeGENE HP試劑。若說(shuō)到試劑的溫和性，恐怕X-tremeGENE 9試劑要更勝一籌。

X-tremeGENE 9試劑的價(jià)格為1764元/0.4 ml、3545元/1 ml，X-tremeGENE HP試劑的價(jià)格為2098元/0.4 ml、4851元/1 ml。（價(jià)格僅供參考）

使用X-tremeGENE 9/HD的tips

1. X-tremeGENE 9 DNA轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)儲(chǔ)存在+2至+8°C，X-tremeGENE HP DNA轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)儲(chǔ)存在-15至-25°C。
2. 使用前，將裝有X-tremeGENE DNA轉(zhuǎn)染試劑的玻璃瓶放置于+15至+25°C，并漩渦一秒。
3. 請(qǐng)勿分裝X-tremeGENE DNA轉(zhuǎn)染試劑；將剩余的轉(zhuǎn)染試劑保存在原裝的玻璃瓶?jī)?nèi)。

4. 盡量避免未稀釋的X-tremeGENE DNA轉(zhuǎn)染試劑與塑料表面的接觸。
5. 使用時(shí)，X-tremeGENE DNA轉(zhuǎn)染試劑與DNA復(fù)合物的最小體積為100μl。減少?gòu)?fù)合物體積將會(huì)顯著降低轉(zhuǎn)染效率。
6. 請(qǐng)避免使用聚苯乙烯類管子或微孔板進(jìn)行X-tremeGENE DNA轉(zhuǎn)染試劑與DNA復(fù)合物的制備。若不能避免聚苯乙烯材料，應(yīng)確使轉(zhuǎn)染試劑直接加入無(wú)血清培養(yǎng)基或Opti-MEM I低血清培養(yǎng)基中。
7. 請(qǐng)勿使用(聚)硅酮處理的吸頭或管子。

8. 確保細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時(shí)期仍處于指數(shù)增長(zhǎng)階段。
9. 轉(zhuǎn)染時(shí)，應(yīng)設(shè)計(jì)合適的對(duì)照，包括：(1)未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞；(2)僅加入轉(zhuǎn)染試劑的細(xì)胞；(3)僅加入DNA的細(xì)胞。

10. 轉(zhuǎn)染試劑與DNA的最優(yōu)比例，以及復(fù)合物的最適總體積，應(yīng)根據(jù)細(xì)胞系、細(xì)胞密度、檢測(cè)時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況和基因表達(dá)的不同進(jìn)行調(diào)整。

X-tremeGENE siRNA 轉(zhuǎn)染試劑

X-tremeGENE siRNA 轉(zhuǎn)染試劑是一個(gè)基于脂質(zhì)體的、并經(jīng)過(guò)優(yōu)化的轉(zhuǎn)染試劑。雖說(shuō)名字上寫(xiě)著siRNA，但它也能用于siRNA和表達(dá)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染。它能和小干擾 RNA（siRNA）或siRNA/質(zhì)粒DNA混合物形成復(fù)合物，并高效地轉(zhuǎn)入動(dòng)物細(xì)胞，引發(fā)相應(yīng)的基因沉默。相對(duì)較小的細(xì)胞內(nèi)毒性，確保觀測(cè)到的細(xì)胞效應(yīng)僅同轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染的siRNA相關(guān)。有無(wú)血清均可進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染后無(wú)需進(jìn)行換液操作。

操作流程：用無(wú)血清Opti-MEM分別稀釋X-tremeGENE siRNA 轉(zhuǎn)染試劑和siRNA，混合并在室溫下孵育15-20分鐘。加入細(xì)胞，監(jiān)控干擾效果。
價(jià)格：2816元/1 ml，11981元/5×1 ml（24孔板的每孔建議用量為2.5 μl）（價(jià)格僅供參考）

使用X-tremeGENE siRNA的tips

1. 對(duì)于初次優(yōu)化，使用下列量的X-tremeGENE siRNA轉(zhuǎn)染試劑（µl）和siRNA（µg）：10:2、2.5:0.5、1:0.2。
2. 根據(jù)羅氏的經(jīng)驗(yàn)，24孔板的每孔使用2.5 μl X-tremeGENE siRNA轉(zhuǎn)染試劑，可實(shí)現(xiàn)大部分細(xì)胞類型的高效knockdown。
3. 如果可能，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)排除抗菌劑。一旦建立了高效的條件，在監(jiān)控轉(zhuǎn)染結(jié)果時(shí)可加回這些組分。X-tremeGENE Reagent:siRNA復(fù)合物必須在不含血清的培養(yǎng)基中制備，即使細(xì)胞在血清存在時(shí)轉(zhuǎn)染。

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細(xì)胞特異的轉(zhuǎn)染步驟

羅氏提供了一些細(xì)胞特異的轉(zhuǎn)染步驟（Cell-type specific protocols），作為您使用轉(zhuǎn)染試劑的指引。當(dāng)然，這些僅供參考。羅氏還有一個(gè)轉(zhuǎn)染數(shù)據(jù)庫(kù)，提供了相關(guān)引用文獻(xiàn)的鏈接以及一些客戶反饋。您可以根據(jù)細(xì)胞名稱搜索相關(guān)的轉(zhuǎn)染步驟，使用下拉菜單，比較方便。網(wǎng)站上例如：在搜索用X-tremeGENE 9轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染293細(xì)胞時(shí)，網(wǎng)頁(yè)上出現(xiàn)如下結(jié)果。

293細(xì)胞已被7位客戶成功轉(zhuǎn)染，利用X-tremeGENE 9轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒DNA。
轉(zhuǎn)染類型：瞬時(shí)
以下比例獲得了最佳結(jié)果（試劑µl:DNA µg）：3:1；2:1
注意：這些來(lái)自客戶反饋的比例僅作為指引，未經(jīng)過(guò)羅氏驗(yàn)證。最佳的轉(zhuǎn)染條件可能有所差異，須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。