美國DRG原裝進(jìn)口，貨號(hào)：EIA-1612

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DRG公司的雌三醇酶免試劑盒可用于孕婦中孕期血清游離雌三醇的體外檢測。

雌三醇（E3）是由孕期胎盤生成的主要雌激素，游離E3通過胎盤進(jìn)入母親的血循環(huán)，在那里很快降解為葡糖苷酸和硫酸鹽衍生物以便于排泄。雌三醇在母親血液中的半衰期只有20-30分鐘，因此可以方便快捷的評(píng)價(jià)最近的胎兒狀態(tài)。血漿雌三醇水平穩(wěn)定地升高且在孕晚期（28-40周）升高得最快。胎盤雌三醇的產(chǎn)生突然減少將導(dǎo)致母親血清的游離雌三醇快速降低，測定游離雌三醇比測定血清總E3或尿中E3有許多可能的優(yōu)勢，游離雌三醇水平與母親的肝腎功能無關(guān)，也不受某些抗體的影響，因此游離雌三醇更準(zhǔn)確地反映糖尿病孕婦胎兒的結(jié)果。因?yàn)橛坞x雌三醇不會(huì)發(fā)生任何水解，所以我們可以更快得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。DRG公司的E3酶免試劑盒是以一種非同位素的方法檢測人血清中的游離E3。這種方法利用了一種高特異性的E3抗體和酶聯(lián)分析物。最后用酶標(biāo)儀檢測顯色產(chǎn)物。此試劑盒有效期長，無放射性同位素的影響，而且有注冊證明，因此它廣泛適用于各大小實(shí)驗(yàn)室。

    DRG公司的雌三醇（游離的）酶免試劑盒是一種基于競爭法原理的固相酶免吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）。在此實(shí)驗(yàn)中，雌三醇用辣根過氧酶標(biāo)記。將含雌三醇的血清與辣根過氧酶標(biāo)記的雌三醇混合并加入到包被板的微孔中。雌三醇的抗體已預(yù)先包被在包被板的微孔上。溫育一個(gè)小時(shí)后，用洗滌液洗去未結(jié)合的辣根過氧酶標(biāo)記的雌三醇和樣品雌三醇。再向微孔中加入底物液，溫育之后再加入能產(chǎn)生有色產(chǎn)物的終止液，之后在酶標(biāo)儀上讀取OD值。

注：儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。

1)      兔抗雌三醇抗體包被的包被板，12 ×8孔，微孔中包被了雌三醇抗體。

2)      雌三醇血清標(biāo)準(zhǔn)，共6支(標(biāo)準(zhǔn)品0-5)， 1ml/支，（0；0.3；1.2； 4；15；40ng/ml），每支都裝有含雌三醇的人血清、鹽緩沖液和防腐劑。注意：將其當(dāng)作乙肝病毒和HIV病毒的潛在傳染原進(jìn)行處理。標(biāo)準(zhǔn)品的原材料用公認(rèn)試劑進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與乙肝病毒表面抗原和HIV間不反應(yīng)。然而，目前沒有任何方法能保證來源于人的產(chǎn)品不含有上述病毒。

3)      雌三醇酶聯(lián)結(jié)物，14m，內(nèi)裝有辣根過氧化物酶標(biāo)記的雌三醇。

4)      TMB底物液，14ml。

5)      終止液，14ml，H2SO4.。

6)      濃縮洗滌液(40X)，30ml。

注意：試劑盒中可能含有像人血清一樣需進(jìn)行特殊處理的材料。在處理剩余材料前，注意查看當(dāng)?shù)仃P(guān)于處理醫(yī)學(xué)垃圾的法規(guī)，以確保處理方法及結(jié)果能滿足當(dāng)?shù)胤�律�?guī)范的要求。

1）標(biāo)準(zhǔn)移液器

2）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

3）吸水紙

1）  把所有的血液和血清當(dāng)作潛在的乙肝病毒和HIV傳染源進(jìn)行處理。

2）  在E3的檢測過程中需要用血清。

3）  采集到血液后立即分離血清，儲(chǔ)存時(shí)用蓋子蓋好。

4）  樣品可在2-8℃的環(huán)境下存放4天，如果想將存放時(shí)間超過4天，則必須凍存。

5）  樣品要避免反復(fù)凍融。

6）  實(shí)驗(yàn)開始前，必須將凍存的血清充分解凍并混合均勻。

7）  不要使用含脂量很高的血清。（實(shí)驗(yàn)開始前必須試圖檢測下血清的含脂量）。

8）  含一定量脂血、溶血和黃疸血的樣品一般不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

用900ml蒸餾水稀釋濃縮洗滌液，貯存于2-8℃的環(huán)境下時(shí)，在有效期內(nèi)穩(wěn)定。

1)      將10μl雌三醇標(biāo)準(zhǔn)品加入到相應(yīng)微孔中。

2)      將質(zhì)控品和病人血清分別10 μl加入到相應(yīng)微孔中。

3)      在每一微孔中加入100μl酶標(biāo)記的雌三醇。

4)      10秒鐘充分混勻。

5)      室溫溫育60分鐘。

6)      棄去孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用400μL洗滌液洗板4次，并在吸水紙上拍干。

7)      在每一微孔中加入100μl TMB底物液。

8)      室溫溫育30分鐘。

9)      在每一微孔中加入100μl終止液。

10)  在450±10nm處讀取OD值。

1）  加試劑時(shí)，保證每孔的加樣順序一致，這可以保證所有的孔都有相同的溫育時(shí)間。每一加樣步驟都應(yīng)無中斷。

2）  為了避免液體殘留在孔壁上，請(qǐng)將試劑直接加入到微孔底部。

3）  為了能得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都做雙份檢測。

4）  實(shí)驗(yàn)所用的移液器包括多道或自動(dòng)移液器的CV（變異系數(shù)）都必須低于1%。

1）在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以E3標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸，其濃度為X軸作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2）在點(diǎn)之間畫一條最好的曲線

3）在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，用質(zhì)控品和未知血清樣品的OD值標(biāo)繪出其相應(yīng)的濃度，并記錄下結(jié)果

DRG公司的MAT3000酶標(biāo)儀及相應(yīng)的線形回歸曲線可用計(jì)算機(jī)輔助的四參數(shù)和三次回歸曲線來直接讀取OD  值。

試劑盒的使用者必須在實(shí)驗(yàn)開始前閱讀并充分理解說明書。嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作才可以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。處理、儲(chǔ)存、添加試劑時(shí)要特別小心，這對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和精密性具有重要意義。病人樣品的不正當(dāng)處理可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)開始前，請(qǐng)將凍融的樣品充分混合均勻。請(qǐng)勿使用陳舊的和處理錯(cuò)誤的血清樣品。樣品降解及反復(fù)凍融都會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。病人樣品應(yīng)當(dāng)盡早檢測。嚴(yán)重溶血、脂血或黃疸血的樣品會(huì)使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精密度和精確度都比較低。使用這種樣品所獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)當(dāng)小心處理。實(shí)驗(yàn)這應(yīng)當(dāng)使用質(zhì)量更好的樣品來確定結(jié)果。

1）不同試劑盒或不同批次的試劑請(qǐng)勿混合或交換。

2）請(qǐng)勿使用過期試劑。（有效期印在試劑瓶上）

3）每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)當(dāng)在正常范圍、低水平范圍和高水平范圍內(nèi)，用質(zhì)控確定自己實(shí)驗(yàn)室的精密讀和精確度標(biāo)準(zhǔn)。

4）為了保證不同批次試劑盒結(jié)果的可靠性和連續(xù)性，繪圖方式和統(tǒng)計(jì)方法都應(yīng)不斷更新。

人體體液E3的檢測常被用來監(jiān)測胎兒是否生長正常，特別是檢測那些高危產(chǎn)婦。血漿E3的濃度在妊娠20周內(nèi)會(huì)逐漸增加，在晚孕期會(huì)增加得更快。因?yàn)檠�清E3的正常與不正常范圍相當(dāng)寬而且不穩(wěn)定，所以單獨(dú)檢測E3沒有很大的臨床意義。為了確定個(gè)體E3的趨向，我們應(yīng)當(dāng)經(jīng)常監(jiān)測病人的情況。晚孕期血清E3濃度繼續(xù)較低或突然并持續(xù)降低，表明胎兒窘迫或子宮死胎的可能性很高。如果出現(xiàn)這種情況，應(yīng)當(dāng)用相應(yīng)的方法檢測胎兒的情況如何。血清游離E3的水平殷鋼結(jié)果其它臨床方法或診斷方法（羊膜穿刺和超聲波）來說明其臨床意義。在下列病人的血清中也可能檢測到不正常的E3水平：注射了抗生素或皮質(zhì)甾體類激素的病人和母體肝功能削弱的病人。

孕周	參考范圍（ng/ml）	孕周	參考范圍（ng/ml）	雙胎妊娠（ng/ml
12	0.3-1.0	22-23	2.7-16	3-18
13	0.3-11	24-25	2.9-17	3-20
14	1.4-1.6	26-27	3.0-18	4-21
15	1.0-4.4	28-29	3.2-20	4-22
16	1.4-6.5	30-31	3.6-22	5-25
17	1.5-6.6	32-33	4.6-23	6-39
18	1.6-8.5	34-35	5.1-25	7-39
19	1.9-11	36-37	7.2-29	9-38
20	2.1-13	38-39	7.8-37	13-40
21	2.6-14	40-42	8.0-39	--    --

 

 

 

 

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