脊髓灰質炎IgG ELISA試劑盒使用說明
脊髓灰質炎IgG ELISA試劑盒
（德國IBL進口原裝，貨號：RE56921）
德國IBL中國獨家代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務
1、應用范圍
脊髓灰質炎IgG抗體ELISA試劑盒可用于血清和血漿中抗脊髓灰質炎特異性IgG抗體的定量檢測。此試劑盒也可用來檢測其它體液，您可從IBL公司獲取技術支持。此試劑盒僅供體外診斷用。
實驗結果從來都不可以作為醫(yī)學報告的唯一依據，醫(yī)學報告還得考慮病人病史和進行進一步的檢測。
2、前言說明
脊髓灰質炎是一種由腸道病毒引起的傳染病，它廣泛流行于世界各地，并常常導致病人癱瘓和死亡。人類目前知道的人致病性脊髓灰質炎有三種類型：
1類（Brunhilde）：通常會產生嚴重的癥狀。
2類（Lansing）：出現稍微溫和的癥狀。
3類（Leon）：少，但伴隨嚴重癥狀。
脊髓灰質炎病毒主要增生擴展在腸道的淋巴節(jié)內，并通過糞便排泄出去。咽喉也可能會感染脊髓灰質炎病毒，之后病毒就會遺留在人體口腔內。人感染脊髓灰質炎后，病毒就可以通過單核細胞分布到其它淋巴節(jié)，之后在淋巴節(jié)繁殖成各種各樣的脊髓灰質炎病毒。在第二個viremic階段，病毒就停留在所有的器官和中樞神經系統(tǒng)的其它器官中。在90%以上感染了脊髓灰質炎的病人都不會出現任何主觀癥狀。在其它剩余的病例中會出現：伴隨低燒的非特異性疾病、頭痛和喉嚨發(fā)炎、痢疾、惡心和嘔吐。伴隨有肌肉疼痛和大腦神經的經典麻痹癥非常少見。再次康復階段要持續(xù)兩年，而且常常會出現持久的破壞。脊髓灰質炎目前還沒有治療方法，僅用阿司匹林和體操的對癥治療會有些效果。在亞洲地區(qū)的很多國家中，脊髓灰質炎仍然是地方性的，但WHO已開始了巨大的工程來根除此疾病。在歐洲會有因旅游者帶進的脊髓灰質炎病例存在，有時候還是致命性的。在病毒潛伏期，通過檢測糞便或咽喉沖洗物中的傳染原或檢測血液中的抗體可診斷脊髓灰質炎。血液抗體的檢測通常是通過中和檢測進行的，雙份血清檢測有滴度差異，所以三種類型脊髓灰質炎病毒必須分別檢測。最近，脊髓灰質炎IgG ELISA實驗用類似白喉和百日咳的方法進行了改進，這種新的ELISA試劑盒可同時檢測三種類型的脊髓灰質炎病毒。這種血清學反應是由既往感染或免疫接種所導致的。
3、實驗原理
脊髓灰質炎IgG抗體檢測試劑采用酶聯免疫的原理。脊髓灰質炎抗原包被在包被板板條的微孔上。在包被板的微孔中加入稀釋好的病人血清或即用型的標準品，之后血清中的IgG抗體會結合到固相脊髓灰質炎抗原上。室溫下溫育1小時后，用洗滌液洗板除去未結合的物質。之后加入過氧酶標記的即用型抗人IgG，溫育30分鐘。之后再洗板，洗板后加入TMB底物液并溫育20分鐘，此時溶液變成藍色。加入終止液終止酶反應，溶液又藍色變成黃色，450nm處檢測OD值。IgG抗體的濃度與溶液所顯示的顏色強度成正比。
4、儲存與穩(wěn)定性
將試劑盒儲存于2-8℃的環(huán)境下，有效期（標記在標簽上面）內穩(wěn)定。使用前，將所有成分平衡至室溫（18-25℃）。不用的板條應當重新密封好，試劑瓶的蓋子要蓋好，并儲存于2-8℃的環(huán)境下。打開了的試劑盒必須在三個月內用完。
5、樣品的采集與儲存
血清，血漿（EDTA，肝素）
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按照靜脈穿刺的常規(guī)注意事項采集樣品，血液樣品自采集到實驗時都必須保證其化學完整性。不要使用明顯溶血、黃疸和脂血樣品�；鞚岬臉悠窇斣趯嶒為_始前離心以除去所有的顆粒性物質。 | |||
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儲存 |
2-8℃ |
≤-20℃ |
避免太陽直射，避免反復凍融。 |
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穩(wěn)定性 |
48小時 |
＞48小時 | |
6、試劑盒成分
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4×2ml |
CAL A-D |
標準品A-d：PBS稀釋的人血清，內含抗脊髓灰質炎病毒IgG抗體，另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane，即用。 |
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1×14ml |
ENZCONJ IgG |
酶聯物：辣根過氧酶標記的抗人IgG和蛋白緩沖液。另含0.01%的Methylisothiazolone和0.01%的Bromonitrodioxane及5mg/l的ProclinTM，即用。 |
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1×12×8 |
MTP |
包被板：12條8孔的包被板，包被了脊髓灰質炎抗原（純化病毒材料的疫苗，混合有1，2，3型病毒），即用。 |
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1×14ml |
TMB SUBS |
TMB底物液，內含TMB，即用。 |
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1×14ml |
TMB STOP |
TMB終止液，0.5M的硫酸，即用。 |
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1×60ml |
DILBUF |
稀釋緩沖液，PBS/BSA緩沖液，內含0.095%的疊氮鈉，即用。 |
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1×60ml |
WASHBUF
CON |
洗滌緩沖液，10倍濃縮，PBS+吐溫20。 |
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2× |
FOIL |
粘性金屬板，溫育期間用來蓋板用。 |
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1× |
BAG |
塑料袋，可重新密封，用來儲存不用的板條。 |
7、實驗所需材料但試劑盒不提供
1） 5ul，100ul和500ul的多道移液器。
2） 可在450nm處讀數的酶標儀。
3） 洗板機
4） 用于血清稀釋的試管
5） 蒸餾水
8、實驗前的準備說明
8.1成分的準備
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稀釋/溶解 |
成分 |
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稀釋劑 |
比例 |
備注 |
儲存 |
穩(wěn)定性 |
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60ml |
洗滌液 |
加入540ml |
蒸餾水 |
1：10 |
如果有必要的話，加熱到37℃以溶解所有晶體，混合均勻 |
2-8℃ |
8周 |
8.2樣品的稀釋
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樣品 |
稀釋 |
稀釋劑 |
比例 |
備注 |
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血清/血漿 |
一般規(guī)律稀釋 |
稀釋緩沖液 |
1：101 |
5ul+500ul |
如果樣品中的IgG濃度比最高標準品的都要高，則樣品必須進行進一步的稀釋。
11、實驗步驟
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1 |
給標準品、質控品和樣品（雙份檢測）準備足夠的板條，留一孔做空白對照。 |
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2 |
將稀釋好的樣品、即用的標準品和質控品各100ul分別加入到相應的微孔中，留出空白孔不要加，用來加底物液。 |
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3 |
蓋板，室溫溫育60分鐘。 |
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4 |
棄取孔內反應液，并加入300ul稀釋好的洗滌液，重復洗板3次，棄取孔內反應夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。 |
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5 |
在每一微孔中加入100ul即用型的酶聯物，留出空白孔不要加。 |
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6 |
蓋板，室溫溫育30分鐘。 |
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7 |
棄取孔內反應液，并加入300ul稀釋好的洗滌液，重復洗板3次，棄取孔內反應夜后在吸水紙上拍干以除去殘余液體。 |
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8 |
在每一微孔中加入100ul即用型的底物液，留出空白孔不要加。 |
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9 |
蓋板，室溫避光溫育20分鐘。 |
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10 |
在每一微孔中加入100ul即用型的終止液以終止底物反應，空白孔也要加底物液。 |
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11 |
充分混合，450nm處讀取OD值，溶液所顯示的顏色60min內穩(wěn)定。 |
12、質量控制
嚴格按照實驗步驟的實驗結果才是有效的。使用者必須嚴格遵守實驗準則或其它實驗標準。就如試劑瓶標簽所述：所有的控制品都必須建立在一個可以接受的范圍內。如果其標準不符合要求，那么實驗則無效，必須重做。為了能進一步研究，每個實驗室都必須知道所有的樣品。如果實驗背離實際結果，應檢查以下參數：試劑有效期，貯存條件，取樣器，實驗設備，溫育時間，清洗方法。
13、結果評價
平均OD值是檢測OD值減去空白孔數值之后的平均值，兩孔間數值的差異不能超過10%。
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OD值 |
矯正后的OD值 |
平均OD值 |
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空白孔 |
0.019 |
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標準品A（陰性質控） |
0.112/0.134 |
0.103/0.115 |
0.109 |
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標準品B（臨界質控） |
0.410/0.472 |
0.391/0.453 |
0.421 |
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標準品C（弱陽性質控） |
1.069/1.121 |
1.050/1.102 |
1.076 |
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標準品D（陽性質控） |
2.186/2.220 |
2.167/2.201 |
2.184 |
上面表格只是個例子，所有數值都是當時的溫度和條件下獲得的，因此上述數值不能當作參考值，參考值必須從其它實驗室去獲取。
13.1定量評價
脊髓灰質炎病毒IgG抗體檢測試劑盒的即用型標準品和質控品用的是一個專門的單位進行定義表述的（U/ml）。如果實驗結果精確并且可以重復定量評價的話，則結果有可能可以作為后續(xù)病人的質控品。質控品和標準品的濃度請見試劑瓶標簽。定量檢測時，用標準品和質控品的OD值對其濃度在坐標紙上進行標繪，之后每一病人樣品的濃度值可以用其OD值從此參考曲線上定量得到。我們可以用計算機程序自動計算記過，濃度計算時，樣品的稀釋因子要重新被考慮進去。
14、特性
將弱陽性質控重復檢測10次可以得到脊髓灰質炎病毒IgG試劑盒的板內差異，其板內差異小于10%。
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。
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