BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明書
BCA蛋白濃度測定試劑盒
產(chǎn)品簡介: BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法，其測定
范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更優(yōu)越的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。BCA
法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。其在562nm 處有最大的吸收
值，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可計(jì)算待測蛋白的濃度。
原理: BCA(bicinchonininc acid)與二價(jià)銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一
起顯示為蘋果綠色，即BCA 工作試劑。在堿性條件下，BCA 與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，蛋白質(zhì)
將Cu2+還原為Cu+，一個(gè)Cu+螯合二個(gè)BCA 分子，工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復(fù)
合物，最大光吸收強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度成正比。
試劑盒組成：
BCA01(50ml) BCA02(100 ml)
試劑A: BCA 堿性溶液50ml 100ml
試劑B:硫酸銅溶液1ml 2 ml
試劑C:標(biāo)準(zhǔn)BSA 蛋白（1mg/ml） 1ml 1 ml× 2
1.5ml離心管25個(gè)50 個(gè)
說明書一份
試劑盒保存：試劑A 和B 在室溫的穩(wěn)定期至少1 年以上。標(biāo)準(zhǔn)蛋白液保存在－20℃,
短期則4℃保存.
測定方法1：（試管法）
1、配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50 體積試劑A，1 體積試劑B 配制適
量BCA 工作液，充分混勻。注意：BCA 工作液室溫24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。工作液配制的量要與
測定所用的比色杯對應(yīng)。每個(gè)測定要做2-3 個(gè)平行反應(yīng)。本處列舉的比色體系所用的是
0.5ml 的比色杯；如果沒有0.5ml 比色杯，反應(yīng)體系需要放大到實(shí)驗(yàn)將采用的比色杯準(zhǔn)
確讀數(shù)所需要的體積。
2、BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的準(zhǔn)備：樣品用水或其它不干擾顯色反應(yīng)的緩沖配置，使待
測定的濃度位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分。每個(gè)反應(yīng)準(zhǔn)備3 個(gè)平行測定。標(biāo)準(zhǔn)曲線一般5-6
個(gè)點(diǎn)即可，根據(jù)樣品的估測濃度確定各點(diǎn)的具體濃度。稀釋BSA 時(shí),可以用水或與樣品
一致溶液。如待測定的濃度為200μg/ml 左右，按下表的次序加入BSA 標(biāo)準(zhǔn)品、樣品及
BCA 工作液。
3、取適當(dāng)體積的標(biāo)準(zhǔn)蛋白（蛋白樣品）以蛋白液：工作液為1：20 的比例混勻，
37℃溫浴30min，冷卻至室溫。
4、將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品在562nm 波長下測定吸光度。
1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的濃度。注意: 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀
釋倍數(shù)。
1 2 3 4 5 6 7 待測樣品
稀釋1
待測樣品
稀釋2
BSA (μl) 0 2.5 5 10 15 20 25
H2O (μl) 25 22.5 20 15 10 5 0 0 0
工作液(μl) 500 500 500 500 500 500 500 500 500
OD562
OD562 平均值
測定方法2：（96孔板）
1、配制BCA 工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50 體積試劑A，1 體積試劑B 配
制適量BCA 工作液，充分混勻。
2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加滅
菌雙蒸水補(bǔ)足到10 微升；取10 微升待測樣品加入96 孔板。每個(gè)測定要做2-3 個(gè)平行.
3、向帶測樣品孔和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入200 微升BCA
工作液（即樣品與工作液的體積比為1：20）混勻。
4、37℃溫浴30min。冷取至室溫。
5、酶標(biāo)儀562nm 波長下測定吸光度。
6、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出樣品
濃度。
注意事項(xiàng)：
1、反應(yīng)顏色的深淺除了與樣品的蛋白質(zhì)濃度相關(guān)外，還與反應(yīng)的溫度有關(guān)。如果樣品
的濃度較高（>50μg/ml），反應(yīng)溫度一般采用37 度。如果樣品蛋白質(zhì)的濃度較低
（<50μg），反應(yīng)的溫度為60℃，該溫度下，色氨酸、酪氨酸和肽鍵得到充分氧化，大
大提高檢測靈敏度。
2、該方法檢測的蛋白質(zhì)濃度范圍20μg-500μg/ml；當(dāng)?shù)鞍诐舛龋?0ug/ml 時(shí)，推薦60℃
溫浴，并將蛋白液：工作液的比例調(diào)至1：8 進(jìn)行測定（增強(qiáng)法）可以檢測到5ug/ml。
試劑A 和B 在室溫的穩(wěn)定期至少1 年以上。標(biāo)準(zhǔn)蛋白液保存在－20℃,短期則4℃保存.
產(chǎn)品簡介: BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法，其測定
范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更優(yōu)越的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。BCA
法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。其在562nm 處有最大的吸收
值，通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可計(jì)算待測蛋白的濃度。
原理: BCA(bicinchonininc acid)與二價(jià)銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一
起顯示為蘋果綠色，即BCA 工作試劑。在堿性條件下，BCA 與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí)，蛋白質(zhì)
將Cu2+還原為Cu+，一個(gè)Cu+螯合二個(gè)BCA 分子，工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復(fù)
合物，最大光吸收強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度成正比。
試劑盒組成：
BCA01(50ml) BCA02(100 ml)
試劑A: BCA 堿性溶液50ml 100ml
試劑B:硫酸銅溶液1ml 2 ml
試劑C:標(biāo)準(zhǔn)BSA 蛋白（1mg/ml） 1ml 1 ml× 2
1.5ml離心管25個(gè)50 個(gè)
說明書一份
試劑盒保存：試劑A 和B 在室溫的穩(wěn)定期至少1 年以上。標(biāo)準(zhǔn)蛋白液保存在－20℃,
短期則4℃保存.
測定方法1：（試管法）
1、配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50 體積試劑A，1 體積試劑B 配制適
量BCA 工作液，充分混勻。注意：BCA 工作液室溫24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。工作液配制的量要與
測定所用的比色杯對應(yīng)。每個(gè)測定要做2-3 個(gè)平行反應(yīng)。本處列舉的比色體系所用的是
0.5ml 的比色杯；如果沒有0.5ml 比色杯，反應(yīng)體系需要放大到實(shí)驗(yàn)將采用的比色杯準(zhǔn)
確讀數(shù)所需要的體積。
2、BSA 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的準(zhǔn)備：樣品用水或其它不干擾顯色反應(yīng)的緩沖配置，使待
測定的濃度位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分。每個(gè)反應(yīng)準(zhǔn)備3 個(gè)平行測定。標(biāo)準(zhǔn)曲線一般5-6
個(gè)點(diǎn)即可，根據(jù)樣品的估測濃度確定各點(diǎn)的具體濃度。稀釋BSA 時(shí),可以用水或與樣品
一致溶液。如待測定的濃度為200μg/ml 左右，按下表的次序加入BSA 標(biāo)準(zhǔn)品、樣品及
BCA 工作液。
3、取適當(dāng)體積的標(biāo)準(zhǔn)蛋白（蛋白樣品）以蛋白液：工作液為1：20 的比例混勻，
37℃溫浴30min，冷卻至室溫。
4、將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品在562nm 波長下測定吸光度。
1、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的濃度。注意: 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀
釋倍數(shù)。
1 2 3 4 5 6 7 待測樣品
稀釋1
待測樣品
稀釋2
BSA (μl) 0 2.5 5 10 15 20 25
H2O (μl) 25 22.5 20 15 10 5 0 0 0
工作液(μl) 500 500 500 500 500 500 500 500 500
OD562
OD562 平均值
測定方法2：（96孔板）
1、配制BCA 工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50 體積試劑A，1 體積試劑B 配
制適量BCA 工作液，充分混勻。
2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加滅
菌雙蒸水補(bǔ)足到10 微升；取10 微升待測樣品加入96 孔板。每個(gè)測定要做2-3 個(gè)平行.
3、向帶測樣品孔和蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入200 微升BCA
工作液（即樣品與工作液的體積比為1：20）混勻。
4、37℃溫浴30min。冷取至室溫。
5、酶標(biāo)儀562nm 波長下測定吸光度。
6、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中求出樣品
濃度。
注意事項(xiàng)：
1、反應(yīng)顏色的深淺除了與樣品的蛋白質(zhì)濃度相關(guān)外，還與反應(yīng)的溫度有關(guān)。如果樣品
的濃度較高（>50μg/ml），反應(yīng)溫度一般采用37 度。如果樣品蛋白質(zhì)的濃度較低
（<50μg），反應(yīng)的溫度為60℃，該溫度下，色氨酸、酪氨酸和肽鍵得到充分氧化，大
大提高檢測靈敏度。
2、該方法檢測的蛋白質(zhì)濃度范圍20μg-500μg/ml；當(dāng)?shù)鞍诐舛龋?0ug/ml 時(shí)，推薦60℃
溫浴，并將蛋白液：工作液的比例調(diào)至1：8 進(jìn)行測定（增強(qiáng)法）可以檢測到5ug/ml。
試劑A 和B 在室溫的穩(wěn)定期至少1 年以上。標(biāo)準(zhǔn)蛋白液保存在－20℃,短期則4℃保存.
標(biāo)簽：
BCA蛋白濃度測定試劑盒
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