實(shí)驗(yàn)必須使用自然產(chǎn)生的尿液,也可使用24小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生的尿液。收集病人24小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生的尿液,將它加入到含10-15ml 6N HCl防腐劑的容器中。為了計(jì)算結(jié)果,請(qǐng)確定尿液的總體積。實(shí)驗(yàn)開始前請(qǐng)先將樣品離心。 | |||
儲(chǔ)存 |
2-8℃ |
2-8℃ |
避免太陽(yáng)直射,避免反復(fù)凍融 |
穩(wěn)定性 |
4天 |
15年 |
數(shù)量 |
標(biāo)記 |
成分 |
1×12×8 |
MTP |
包被板,可拆,微孔中包被了抗兔IgG(羊,多克。。 |
1×5ml |
ANTISERUM |
褪黑激素硫酸鹽抗血清,即用,內(nèi)含:兔抗血清、Tris緩沖液和0.01%的硫柳汞 |
1×0.2ml |
ENZCONJ CONC |
酶聯(lián)物,40倍濃縮,內(nèi)含過氧酶標(biāo)記的褪黑激素硫酸鹽、Tris緩沖液和1%的硫柳汞。 |
1×7×0.1ml |
CAL A-G |
標(biāo)準(zhǔn)品A-G,0;1.7; 5.2; 15.6; 46.7; 140; 420ng/mL
0;5.2;15.9;47.6;142;427;1281nmol/L。即用,內(nèi)含褪黑激素硫酸鹽、Tris緩沖液和0.01%的硫柳汞。 |
1×2×0.1ml |
CONTROL 1+2 |
質(zhì)控品1+2,即用,內(nèi)含0.02%的;硫柳汞。具體濃度及可允許范圍請(qǐng)見試劑瓶標(biāo)簽。 |
1×60ml |
ASSAYBUF CONC |
檢測(cè)緩沖液,紅色,即用,內(nèi)含Tris緩沖液、BSA和0.01%的硫柳汞。 |
1×50ml |
WASHBUF CONC |
洗滌液,20倍濃縮,內(nèi)含磷酸緩沖液、吐溫和0.1%的硫柳汞。 |
1×0.9ml |
TMB SUBS CONC |
TMB底物液,31倍濃縮,內(nèi)含TMB、緩沖液和穩(wěn)定劑。 |
1×27ml |
TMB緩沖液 |
TMB底物緩沖液,儲(chǔ)存時(shí)避免太陽(yáng)直射,即用,內(nèi)含H2O2、檸檬酸鹽緩沖液和穩(wěn)定劑。 |
1×12ml |
TMB STOP |
TMB終止液,即用,1M的H2SO4。 |
3× |
FOIL |
粘性金屬板 |
稀釋/溶解 |
成分 |
|
稀釋劑 |
比例 |
備注 |
儲(chǔ)存 |
穩(wěn)定性 |
15ml |
洗滌液 |
300ml |
雙蒸水 |
1:20 |
18-25℃將晶體溶解掉 |
2-8℃ |
4周 |
50ul |
酶聯(lián)物 |
2ml |
檢測(cè)緩
沖液 |
1:41 |
臨時(shí)配置,只能使用一次 |
18-25℃ |
30min |
300ul |
TMB底物
液 |
9ml |
TMB底物
緩沖液 |
1:31 |
臨時(shí)配置,只能使用一次 |
18-25℃ |
10min |
1 |
將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人尿液樣品分別10ul加入到聚苯乙烯或聚丙烯或玻璃試管中,避免太陽(yáng)直射。 |
2 |
在每一試管中加入500ul檢測(cè)緩沖液,旋渦混合。 |
1 |
將已稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣品分別50ul加入到相應(yīng)的微孔中。 |
2 |
在每一微孔中加入50ul臨時(shí)配置好的酶聯(lián)物。 |
3 |
在每一微孔內(nèi)加入50ul褪黑激素硫酸鹽抗血清。 |
4 |
蓋板,室溫(18-25℃)包被板振蕩器(500rpm)溫育2小時(shí)。 |
5 |
在溫育快要結(jié)束的10分鐘前,請(qǐng)將TMB底物液準(zhǔn)備好。 |
6 |
移去粘性金屬板,棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250ul稀釋好的洗滌液洗板4次,吸水紙上拍干以除出殘余液體。 |
7 |
如果可以的話,請(qǐng)用8道移液器加底物液和終止液。加底物液和終止液的時(shí)間間隔應(yīng)當(dāng)相同,使用 |
8 |
在每一微孔中加入200ul TMB底物液。 |
9 |
室溫(18-25℃)包被板振蕩器(500rpm)溫育30min。 |
10 |
在每一微孔中加入100ul TMB終止液,輕請(qǐng)振板以混合溶液。 |
11 |
加終止液后60min內(nèi)在450nm處讀取OD值。 |
年齡 |
數(shù)目 |
褪黑激素硫酸鹽 | |||
24小時(shí)尿液(ug) |
夜間尿液(ug/h) | ||||
平均值 |
90%的比例 |
平均值 |
90%的比例 | ||
20-35 |
26 |
36.8 |
15.6-58.1 |
2.8 |
0.9-5.6 |
36-50 |
17 |
29.6 |
9.9-52.9 |
2.1 |
0.6-3.6 |
51-65 |
16 |
20.4 |
12.3-32.8 |
1.5 |
0.9-2.5 |
> |
16 |
15.8 |
7.5-32.7 |
1.0 |
0.3-2.3 |