熒光染料CFSE(CFDA-SE),是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料,可以標(biāo)記活體細(xì)胞。其基本原理如下:CFSE能夠輕易穿透細(xì)胞膜,在活細(xì)胞內(nèi)與胞內(nèi)蛋白共價(jià)結(jié)合,水解后釋放出綠色熒光。在細(xì)胞分裂增殖過程中,它的熒光強(qiáng)度會隨著細(xì)胞的分裂而逐級遞減,標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中,因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半,根據(jù)這一特性,它可被用于檢測細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。另外,CFSE標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長達(dá)數(shù)周之久,它常被用來做活體細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。熒光探針CFSE進(jìn)入細(xì)胞后定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核,在細(xì)胞核的熒光染色最強(qiáng),并證實(shí)CFSE不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡單,且不用放射性同位素,不存在安全隱患?梢愿焖伲鼫(zhǔn)確和更安全的得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
CFSE:羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯(5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)-3',6'-O,O'-diacetylfluorescein)
優(yōu)點(diǎn):
1. 活體標(biāo)記:可以追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。
2. 時(shí)間長:標(biāo)記的熒光可以維持長達(dá)數(shù)周之久。
3. 安全:不需使用放射性同位素。
4. 相關(guān)性高:與H3摻入法結(jié)果一致,可代替后者。
5. 特定跟蹤:可以與細(xì)胞亞群特定抗體結(jié)合使用。
6. 簡單:操作簡單,可靠。
7. 穩(wěn)定:進(jìn)入細(xì)胞后熒光不受內(nèi)環(huán)境影響。
8. 結(jié)果客觀:對細(xì)胞生理活動(dòng)沒有任何影響。
9. 經(jīng)濟(jì)實(shí)惠:費(fèi)用經(jīng)濟(jì),效率高。
用途:
1. 細(xì)胞增殖檢測(尤其是淋巴細(xì)胞的增殖檢測)。
2. 體內(nèi)示蹤。
3. 細(xì)胞熒光標(biāo)記。
4. 細(xì)胞毒性檢測。
其他:
1. 檢測儀器:熒光電鏡,流式細(xì)胞儀,CO2培養(yǎng)箱,移液器等
2. 激發(fā)波長:500nm
3. 發(fā)射波長:520nm