PCR反應(yīng)樣品的準(zhǔn)備和加樣過程在整個PCR反應(yīng)中是非常重要的操作。手工加樣操作很難保證每孔加樣的準(zhǔn)確性和精確性。只有自動化的加樣工作站才能確保微量加樣的可靠性。

20年前，Kary Mullis 發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)（PCR），在生命科學(xué)研究和醫(yī)藥多個應(yīng)用領(lǐng)域引起了重大的變革。從那時起，這種DNA復(fù)制新技術(shù)就不斷在發(fā)展。 最新的例子，就是應(yīng)用到重癥急性呼吸道綜合癥（SARS）的檢測。借助聚合酶鏈反應(yīng)，準(zhǔn)確無誤地檢測到冠狀病毒病原體。PCR 反應(yīng)特征需要特殊的條件和技巧。實際工作中，PCR可以擴(kuò)增10～100個DNA分子，這種高靈敏性和特異性的PCR具有很高的應(yīng)用價值。PCR反應(yīng)樣品的準(zhǔn)備和加樣過程在整個PCR反應(yīng)中是非常重要的操作。手工加樣操作很難保證每孔加樣的準(zhǔn)確性和精確性。特別是384孔板孔間的距離只有4.5mm，因此對加樣者的熟練度要求非常高。只有自動化的加樣工作站才能確保如此微量加樣的可靠性。

告別繁瑣緊張的移液工作

許多分子生物學(xué)方法實現(xiàn)了自動化，自動化的領(lǐng)域仍在不斷擴(kuò)大，已經(jīng)開始替代傳統(tǒng)的手工操作方法。
Eppendorf的移液工作站epMotion® 5070用于實時定量PCR（qPCR）體系與手工方法的qPCR體系進(jìn)行比較。移液工作站epMotion 5070參與的操作包括標(biāo)準(zhǔn)的梯度稀釋、一系列轉(zhuǎn)移液體，以及加樣到反應(yīng)孔等等。

為擴(kuò)增特異性靶基因，并檢測出擴(kuò)增信號，將使用Eppendorf的RealMasterMix Probe試劑，它是唯一經(jīng)過優(yōu)化的、用于水解探針為檢測原理的qPCR，其特點是自有專利的HotMaster® TaqDNA聚合酶適合常溫下的PCR反應(yīng)建立。

使用兩個qPCR平臺：ABI Prism 7000SD(Applied Biosystem，F(xiàn)oster City，CA,USA)和Bio-Rad iCycler iQ（Bio-Rad，Hercules，CA，USA）。

簡而言之，用Eppendorf自動移液工作站epMotion® 5070參與的實時qPCR系統(tǒng)，與手工方法的PCR相比較，手工操作的常見缺陷可以減少，同時提高可重復(fù)性和準(zhǔn)確性，以及全面減少污染的可能性。

輕松完成加樣工作

經(jīng)常用 96 孔或者 384 孔板做 PCR 實驗，或者經(jīng)常處理酶標(biāo)板的工作者，一定體會到，做此類試驗需要注意力高度集中。時間長了，感覺精疲力盡。在操作此類試驗時，經(jīng)常發(fā)生一些失誤。比如，換完吸嘴后，忘記了第 23 欄孔是否已經(jīng)加好引物？從而不知道是從 22 欄開始，還是從23欄開始？有了epMotion 5070 小型自動加樣工作站，就不會再出現(xiàn)諸如此類的問題。在短短的7min里，就可以將實驗需要的試劑，如 HotMasterMix，分子生物學(xué)級別的純凈水，或者 96 種不同的樣品等加入到96孔板。如果是384孔板，可能需要 21min，這是因為epMotion5070 是一臺小型的加樣工作站。假如是將同一種樣品分到 96 孔，整個過程只需2 min！

完美組合

自動加樣工作站可以應(yīng)付所有的重復(fù)加樣工作，這是毫無疑問的。如果配合 Eppendorf 其他產(chǎn)品如試劑和耗材，即可為 PCR 實驗提供一個完美的實驗條件。如采用 Eppendorf的HotMasterMix 即用型試劑盒作熱啟動的 PCR 反應(yīng)，這種情況非常適合自動加樣工作站處理。因為 HotMaster 熱啟動酶可以儲存在普通的冰箱中，無需事先解凍，而且該試劑盒可以長時間置于工作臺中，無需冷卻。其熱啟動性能特征防止酶與其他成分的預(yù)反應(yīng)。原因是 HotMaster 試劑盒有專利的HotStart / Cold Stop技術(shù)，可以在整個PCR 循環(huán)過程中達(dá)到熱啟動/冷終止的效果。有別于其他傳統(tǒng)的熱啟動試劑盒。而其他品牌的熱啟動酶，經(jīng) 95℃孵育激活后，不能恢復(fù)低溫時阻斷 Taq聚合酶的功能。而且使用該試劑盒，無需摸索合適的鎂離子濃度，因為MasterMix 的緩沖液系統(tǒng)具有自我調(diào)節(jié)鎂離子濃度的功能，可以適合各種PCR的反應(yīng)條件。

96，384 twin.tec PCR 板尤其適合自動加樣系統(tǒng)，符合SDS 標(biāo)準(zhǔn)。twin.tecPCR 板的邊緣是聚碳酸酯材質(zhì)，薄壁孔壁是聚丙烯材質(zhì)。這樣的材質(zhì)和制作工藝，可耐受高溫和機(jī)械的壓力，實驗偏差小。

自動加樣對吸嘴的材質(zhì)和形狀要求很高。epMotion 專用的吸嘴 epT.I.P.S放置于無污染的吸嘴盒，且分為優(yōu)質(zhì)級和 PCR 潔凈級兩種不同純度的吸嘴套裝。根據(jù)實驗需要，還可以選擇有濾芯和無濾芯的吸嘴。

不再乏味

最值得慶幸的是，無需擔(dān)心加樣重復(fù)性，也不用再為忘記加樣次序的問題煩惱。從此這種乏味的，但又必須不斷重復(fù)的工作，交給 epMotion 了，不僅自動化程度高，而且結(jié)果可靠。