電泳帶型分析
DNA電泳需要進(jìn)行帶型分析，在實驗過程中常會發(fā)現(xiàn)所得的帶型出現(xiàn)在這樣那樣的問題。在此，我們對DNA帶型做了相應(yīng)的分析。
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帶型 |
原因分析 |
解決辦法 |
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弱帶或無帶 |
上樣的DNA量不夠 |
增加DNA的上樣量，聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高 |
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DNA降解 |
避免DNA的核酸酶污染 | |
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電泳時間過長，DNA跑出 |
減短電泳時間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度 | |
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EB染色的DNA，紫外光源不合適 |
應(yīng)用短波長（254nm），增強(qiáng)紫外燈靈敏度 | |
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DNA帶缺失 |
小DNA帶走出凝膠 |
減短電泳時間，降低電壓，增強(qiáng)凝膠濃度 |
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分子大小相近的DNA帶不易分辨 |
增加電泳時間，核準(zhǔn)正確的凝膠濃度 | |
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DNA 變性 |
電泳前請勿高溫加熱DNA鏈，以20mM NaCl Buffer稀釋DNA | |
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巨大DNA鏈，凝膠電泳不合適 |
在脈沖凝膠電泳上分析 | |
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DNA帶模糊 |
DNA降解 |
避免核酸酶污染 |
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DNA上樣量過多 |
減少凝膠中DNA上樣量 | |
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所用電泳條件不合適 |
電泳時電壓不應(yīng)超過20V/cm，溫度＜30℃,巨大DNA鏈，溫度應(yīng)＜15℃，核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力 | |
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DNA樣含鹽過高 |
電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽 | |
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有蛋白污染 |
電泳前酚抽提去除蛋白 | |
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DNA變性 |
電泳前勿加熱，用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA | |
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不規(guī)則DNA帶遷移 |
對于λ/Hind III片段COS位點復(fù)性 |
電泳前加熱DNA 65℃加熱5-10分鐘，然后在冰上冷卻5分鐘 |
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電泳條件不合適 |
電泳電壓不超過20V/cm，溫度＜30℃，電泳緩沖液有足夠的緩沖能力 | |
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DNA變性 |
以20mM NaCl Buffer稀釋DNA，電泳前勿加熱 |
標(biāo)簽：
電泳帶型分析
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