透射電鏡(TEM)利用電子束作光源，用電磁場作透鏡，經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上，形成明暗不同的影像，TEM在中和物理學(xué)和生物學(xué)相關(guān)的許多科學(xué)領(lǐng)域都是重要的分析方法，如基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、病毒學(xué)、材料科學(xué)、以及納米技術(shù)、半導(dǎo)體研究等等。透射電子顯微鏡的分辨率比光學(xué)顯微鏡高的很多，分辨力可達0.2nm，200-200k倍之間連續(xù)可調(diào); 可以用于觀察樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)，甚至可以用于觀察僅僅一列分子的結(jié)構(gòu)。主要設(shè)備：超薄切片機Leica EM UC7，透射電鏡HITACHI HT7700 120kv。

超薄切片機Leica EM UC7儀器的性能指標(biāo) 

　　1.利用重力切片，不用馬達驅(qū)動切片。 

　　2.切片窗口0.2-14mm可調(diào)，切片速度0.05-100mm/s旋鈕控制，切片厚度0-15000nm旋鈕控制，步長控制0.1-15μm。 

　　3.全馬達操控刀臺，東西方向可測量，并帶自動修塊功能。

透射電鏡HITACHI HT7700儀器的性能指標(biāo) 

　　1.加速電壓：120kV；分辨率：0.204nm。 

　　2.束斑尺寸：高反差模式0.5至2µm（5步）；高分辨模式0.5至1µm（5步）。 

　　3.底插入式樣品臺，2048*2048像素。 

　　4.將透射電鏡操作統(tǒng)一于顯示器上，無需直視熒光板，實現(xiàn)了無膠片化，可以在明亮的室內(nèi)進行觀察。

送樣要求：

以下所有樣本必須盡量新鮮，固定液或懸浮液都不得冷凍結(jié)冰!

　　1、動物組織樣本

　�、�1-3min內(nèi)取樣，取樣組織2mmX2mm大小，盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。超出此范圍后組織會無法完全固定，后續(xù)實驗無法完成，務(wù)必請重視此過程

　�、谌〔臅r盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚，腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。

　�、廴〔臅r一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。

　�、芙M織取下后立即投入電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。4°時樣本可保存1個月左右

　　2、植物組織樣本

　�、偃〔囊�求同動物組織樣本。

　�、诮M織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底，如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內(nèi)，組織不能漂浮在固定液表面。

　　3、細(xì)胞樣本

　　貼壁細(xì)胞：

　　方法一：

　�、倥囵B(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基，加入2.5%的常溫戊二醛固定液。

　�、诔�溫固��5min左右，用細(xì)胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個方向輕輕刮下細(xì)胞，切記不要反復(fù)刮，避免細(xì)胞刮破。

　�、塾冒褪衔�管把��(xì)胞液吸入離心管內(nèi)，放入離心機(不超過3000轉(zhuǎn))，離心2min左右，細(xì)胞團要有綠豆大小。

　�、軛壒潭ㄒ汉蠹有碌碾婄R固定液，把細(xì)胞團輕輕挑起，懸浮于固定液中。

　�、奘覝乇芄夤潭�30min，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

　　方法二：(對細(xì)胞形態(tài)沒有要求的)

　　①培養(yǎng)好的細(xì)胞棄培養(yǎng)基，加入胰酶。

　　②胰酶消化好后(時間不宜過長)，用培養(yǎng)基終止消化，用吸管把細(xì)胞吹下來。吸入離心管，離心(不超過3000轉(zhuǎn))，2min左右，細(xì)胞團要有綠豆大小。

　�、蹢壣锨�，加入2.5%的常溫戊二醛固定液，把細(xì)胞團輕輕挑起，懸浮于固定液中。

　�、苁覝乇芄夤潭�30min，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

　　懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞要肉眼可見細(xì)胞沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

　　4、細(xì)菌樣本

　　長于固體培養(yǎng)基的細(xì)菌：連帶著培養(yǎng)基一起挑下細(xì)菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存， 4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

　　懸浮細(xì)菌孢子等：離心收集細(xì)菌要肉眼可見細(xì)菌沉淀綠豆大小，棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h，再轉(zhuǎn)移至4°保存，4°冰袋運輸，在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。

　　5、病毒

　　破碎組織細(xì)胞，粗離心去除細(xì)胞碎片取上清，超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒，遠距離-80°凍存運輸，近距離4°保存運輸，盡快滴片做負(fù)染后及時電鏡觀察拍照。

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