10x Genomics 單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單個(gè)細(xì)胞水平進(jìn)行高通量轉(zhuǎn)錄組測序的一項(xiàng)新技術(shù)。

服務(wù)類別：	測序/合成	總訪問：	1409
最后更新：	2023-10-20	半年訪問：	121
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服務(wù)商：上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司

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服務(wù)介紹
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單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單個(gè)細(xì)胞水平進(jìn)行高通量轉(zhuǎn)錄組測序的一項(xiàng)新技術(shù)，能夠有效解決細(xì)胞異質(zhì)性以及bulk RNA-seq被掩蓋的細(xì)胞群內(nèi)轉(zhuǎn)錄組異質(zhì)性難題，有助于發(fā)現(xiàn)新的稀有細(xì)胞類型，深入了解細(xì)胞生長過程中的表達(dá)調(diào)控機(jī)制。

基于10x Genomics和BD RhapsodyTM平臺(tái)可以實(shí)現(xiàn)單個(gè)樣本數(shù)千甚至上萬個(gè)單細(xì)胞群體分析，解決傳統(tǒng)單細(xì)胞測序在通量或擴(kuò)展性方面存在的不足，為單細(xì)胞研究開拓了新的思路。

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△ 歐易生物單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)已通過10x Genomics CSP官方認(rèn)證

技術(shù)優(yōu)勢

通量高：一次可以同時(shí)測8個(gè)樣本，每個(gè)樣本最多可以檢測到上萬個(gè)細(xì)胞

周期短：17分鐘內(nèi)完成上萬個(gè)細(xì)胞封裝，一天之內(nèi)完成細(xì)胞懸液制備、單細(xì)胞捕獲、擴(kuò)增以及建庫

捕獲效率高：細(xì)胞捕獲效率高達(dá)65 %

應(yīng)用范圍廣：動(dòng)物細(xì)胞和植物細(xì)胞均可以進(jìn)行單細(xì)胞測序，已廣泛應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性、免疫細(xì)胞群體檢測和胚胎發(fā)育研究等

技術(shù)原理

10x Genomics的Chromium系統(tǒng)利用8通道的微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)，將含barcode的凝膠珠（Gel Beads）、細(xì)胞和酶的混合物、油三者混合，形成GEMs（油包水的微體系）GEMs形成后，細(xì)胞裂解，凝膠珠自動(dòng)溶解釋放大量barcode序列。

隨后mRNA逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生帶有10× barcode和UMI信息的cDNA，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)測序文庫。

建庫流程

（1）凝膠珠進(jìn)入第一個(gè)進(jìn)樣口與細(xì)胞懸液和酶等混合，通過第二個(gè)進(jìn)樣口時(shí)被油滴包裹，形成GEMs，隨后細(xì)胞裂解，凝膠珠溶解，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

（2）油滴破裂，收集cDNA產(chǎn)物，進(jìn)行cDNA擴(kuò)增

（3）構(gòu)建測序文庫進(jìn)行測序

樣本要求

（1）樣品總量：制備成細(xì)胞懸浮液，一個(gè)樣本的細(xì)胞起始量需大于1x10 5個(gè)；

（2）樣品濃度：最終上樣前細(xì)胞濃度在700 - 1,200 cells / μL；

（3）細(xì)胞活性：活細(xì)胞數(shù)目在85 %以上；

（4）細(xì)胞大�。�直徑小于40 μm；

（5）細(xì)胞培養(yǎng)基及緩沖液不能含有Ca 2+和Mg 2+等影響酶活性的物質(zhì)；

（6）組織需解離成單細(xì)胞懸液，植物細(xì)胞需制成原生質(zhì)體。

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