講座背景
 

      為了從一個(gè)印跡中獲得更多的信息，或者遇到珍貴樣本，人們通常在傳統(tǒng)Western Blot中利用洗脫和重雜交（Stripe & Reprobe）的方式進(jìn)行蛋白多靶點(diǎn)分析。

      然而，會(huì)面臨如下令人頭疼的問題：

• 洗脫次數(shù)不夠，無法充分解離靶點(diǎn)和抗體，影響二次雜交

• 洗脫次數(shù)太多，導(dǎo)致膜上蛋白丟失

• 由于每個(gè)靶點(diǎn)和抗體親和力不同，需要不停摸索洗脫條件

   

      進(jìn)而，導(dǎo)致不可避免的蛋白和信號損失。因此，不能獲得準(zhǔn)確的定量數(shù)據(jù)。

      Digital Western Blot （ 即Simple Western ）中的RePlex技術(shù)，是一種優(yōu)化且自動(dòng)化的兩步免疫測定，能夠在不損失信號強(qiáng)度和不影響表位結(jié)合的情況下，獲得精確定量、多重蛋白表達(dá)的數(shù)據(jù)。

      本次網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)中，來自洛桑大學(xué)蛋白質(zhì)分析部門（PAF）的Lorrain博士，介紹了如何利用RePlex技術(shù)，來推進(jìn)三種特定的、多重的生物檢測項(xiàng)目。她同時(shí)也分享了檢測的設(shè)計(jì)和優(yōu)化，其中一個(gè)案例，利用了來自同一物種的兩種抗體，但使用不同檢測通道。以及，比較了幾種常見的管家蛋白與總蛋白歸一化的研究。

      這些研究結(jié)果，為如何設(shè)計(jì)RePlex實(shí)驗(yàn)提供了指導(dǎo)，并體現(xiàn)了RePlex技術(shù)在免疫測定時(shí)的靈活性、可重復(fù)性和精確定量。

• Digital Western Blot工作原理 & 優(yōu)勢

• RePlex技術(shù)解析

• RePlex技術(shù)應(yīng)用案例分享，來自洛桑大學(xué)：HA-HSP90轉(zhuǎn)染 （野生型或磷酸化位點(diǎn)突變型）、管家蛋白 VS 總蛋白定量

• RePlex技術(shù)總結(jié)：

  可量化表達(dá)磷酸化靶標(biāo)和總蛋白水平

  可在同一毛細(xì)管中進(jìn)行總蛋白歸一化檢測

  免疫探針的選擇上有更大的靈活性

  每個(gè)樣品可得出更多的數(shù)據(jù)信息

  節(jié)省耗材、珍貴樣品和寶貴時(shí)間