硫酸葡聚糖鈉DSS(4W)誘導(dǎo)結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)操作方法
瀏覽次數(shù):593 發(fā)布日期:2024-9-30
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葡聚糖硫酸鈉(Dextran Sulfate Sodium, DSS)是一種化學(xué)合成的多糖硫酸酯,主要由葡糖醛酸單位通過(guò)硫酸酯鍵連接而成。其分子式為[C6H7O6Na2O10S]n,分子量在5-500kDa之間。DSS本身對(duì)人體幾乎無(wú)毒,不能被結(jié)腸上皮細(xì)胞吸收,但是可以損傷結(jié)腸上皮細(xì)胞的緊密連接和基底膜,從而增加腸道滲透性,導(dǎo)致腸道菌群和其他抗原進(jìn)入黏膜下層和體循環(huán),激活免疫炎癥反應(yīng),誘導(dǎo)結(jié)腸炎癥狀。
硫酸葡聚糖鈉DSS 36000~50000(平均分子量4W) 是常用的一種結(jié)腸炎造模劑,可通過(guò)損傷結(jié)腸上皮細(xì)胞,誘導(dǎo)結(jié)腸炎癥狀,廣泛用于結(jié)腸炎動(dòng)物模型的建立。
DSS 36000~50000(分子量4W) 誘導(dǎo)結(jié)腸炎主要特點(diǎn)如下:
1. 作用機(jī)制:DSS不能被結(jié)腸上皮細(xì)胞直接吸收,但可損傷上皮細(xì)胞緊密連接和基底膜,導(dǎo)致腸道滲透性增加,促進(jìn)腸道菌群和抗原滲入,激活免疫系統(tǒng),誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。
2. 誘導(dǎo)結(jié)腸炎:給予適量DSS可以在小鼠等動(dòng)物體內(nèi)迅速誘導(dǎo)急性或慢性結(jié)腸炎癥狀,表現(xiàn)出典型的體重減輕、稀便、血便、貧血等,病理表現(xiàn)為結(jié)腸炎癥滲出和潰瘍。
3. 可控性:DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎癥狀是可逆的,停止DSS治療后可自行愈合。DSS的濃度和給藥劑量可以控制結(jié)腸炎的嚴(yán)重程度,實(shí)現(xiàn)從輕度到高度急性甚至慢性炎癥的誘導(dǎo)。
4. 簡(jiǎn)便高效:DSS造模簡(jiǎn)單高效,相比之下,需要較長(zhǎng)時(shí)間誘導(dǎo)的基因敲除等方法更加耗時(shí)費(fèi)力。是結(jié)腸炎研究的理想工具。
DSS 36000~50000(平均分子量4W) 誘導(dǎo)結(jié)腸炎的典型方案:
1. DSS溶液:DSS粉末用蒸餾水配制成3-5%的溶液,于4°C保存。
2. 給藥方式:在飲用水中添加DSS溶液,使小鼠自由飲用。另外也可灌胃給藥。
3. DSS濃度和時(shí)間:3-5%DSS,5-10天,可誘導(dǎo)輕-中度結(jié)腸炎;2%DSS,3周左右,可誘導(dǎo)慢性結(jié)腸炎。濃度和時(shí)間可根據(jù)需要調(diào)整。
4. 評(píng)價(jià)指標(biāo):體重變化、稀便和血便評(píng)分、貧血、結(jié)腸組織病理學(xué)檢查等。
DSS 36000~50000(分子量4W) 誘導(dǎo)結(jié)腸炎的操作方法主要如下:
1. DSS溶液的配制:
- DSS粉末于室溫下加熱至全溶,或在60°C水浴中加熱溶解;也可使用磁力攪拌在室溫下溶解。
- 一般配制成3-5%的溶液,除菌過(guò)濾后4°C保存,2周內(nèi)使用。
- 確保DSS完全溶解,避免粉末殘留,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2. 給藥方式:
- 自由飲用:在飲用水中直接添加DSS溶液,供小鼠自由飲用。此法操作簡(jiǎn)單,但DSS攝入量難以準(zhǔn)確控制。
- 灌胃給藥:以所需DSS量重組為相應(yīng)濃度的溶液,每天灌胃給藥1次。此法DSS攝入可控,但對(duì)小鼠的創(chuàng)傷較大。
3. DSS處理方案的選擇:
- 急性結(jié)腸炎:3-5%DSS,5-10天。可誘導(dǎo)中度至重度急性結(jié)腸炎。
- 慢性結(jié)腸炎:1-3% DSS,2-4周。通過(guò)低劑量長(zhǎng)時(shí)間的刺激誘導(dǎo)慢性炎癥。
- 濃度和時(shí)間可根據(jù)研究需要調(diào)整,從輕度到高度炎癥都可實(shí)現(xiàn)。
4. 動(dòng)物觀察和樣本收集:
- 日常觀察:體重、食欲、糞便狀況等。記錄DSS治療前后的變化。
- 末期處死:收集結(jié)腸組織、血液、糞便等樣本用于病理學(xué)檢查、生化指標(biāo)測(cè)定等。
- 對(duì)照組設(shè)置:以PBS代替DSS治療的對(duì)照組動(dòng)物,用于結(jié)果比較分析。
5. 結(jié)腸炎的評(píng)估:體重變化、DSS刺激前后的糞便評(píng)分、貧血測(cè)試、結(jié)腸病理學(xué)檢查(炎癥程度、潰瘍數(shù)等)。
常用誘導(dǎo)劑:
HB12089 2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)
HC86040 雨蛙素 Ceruletide
HC80476 半胱胺鹽酸鹽 2-Aminoethanethiol HCl, 用于十二指腸潰瘍?cè)炷?br />
HS91679 ;悄懰徕c水合物 Sodium taurocholate hydrate
HS81762 碘乙酸鈉 Sodium iodoacetate,可用于骨關(guān)節(jié)炎(OA)動(dòng)物模型的建立
HT0056 脂多糖LPS Lipopolysaccharides 055:B5
HA1132 硫酸葡聚糖鈉DSS 36000~50000(結(jié)腸炎造模用葡聚糖硫酸鈉4W)