六、實(shí)驗(yàn)方法與步驟

6.1篩（預(yù))選

將大鼠置于Y-迷宮箱中，適應(yīng)3～5分鐘后施以適當(dāng)電擊，直至其探索進(jìn)入所有3臂為止。挑選活躍、對(duì)電擊反應(yīng)較為敏感、逃避反應(yīng)迅速的大鼠供以測(cè)試，淘汰那些反應(yīng)遲鈍或過(guò)于敏感的個(gè)體。

預(yù)選出在電擊次數(shù)≤3次的情況下，連續(xù)2次正確反應(yīng)的動(dòng)物，即對(duì)電擊反應(yīng)較為敏感的大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。在上述初步篩選的基礎(chǔ)上，通過(guò)正式的迷宮訓(xùn)練，淘汰未達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)（學(xué)不會(huì)）的大鼠。

6.2正誤判定的標(biāo)準(zhǔn)

大鼠在受到電擊后直接從起步區(qū)逃至安全區(qū)或在通電后的10秒內(nèi)一次性跑向安全區(qū)為“正確反應(yīng)”，若逃至任何無(wú)燈光的其他臂則記為錯(cuò)誤反應(yīng)。

6.3 達(dá)標(biāo)（學(xué)會(huì)）標(biāo)準(zhǔn)

連續(xù)進(jìn)行10次測(cè)試，其中有9次或以上的正確反應(yīng)（正確反應(yīng)率≥90%）被定為學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)。在每個(gè)實(shí)驗(yàn)日進(jìn)行20次訓(xùn)練測(cè)試，錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)（EN）≤2次，全天總反應(yīng)時(shí)間（TRT）≤120秒作為判定大鼠學(xué)會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)。由于EN反映了大鼠反應(yīng)的正確程度，而TRT則反映了大鼠反應(yīng)時(shí)間的長(zhǎng)短，因此這一標(biāo)準(zhǔn)更為全面地評(píng)估了大鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。

以上是每只大鼠達(dá)標(biāo)（學(xué)會(huì)）的標(biāo)準(zhǔn)，全組大鼠達(dá)標(biāo)（學(xué)會(huì)）的標(biāo)準(zhǔn)為全組正確率（學(xué)會(huì)動(dòng)物數(shù)／該組動(dòng)物總數(shù)×100%）達(dá)85%以上。

6.4. 學(xué)習(xí)測(cè)試

在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，首先將大鼠放入迷宮中適應(yīng)3～5分鐘。

(1) 隨機(jī)休息法：安全區(qū)的燈光以無(wú)規(guī)則次序變換，旨在訓(xùn)練大鼠辨別燈光刺激及安全方位的能力。每次大鼠受電擊后逃到安全區(qū)，燈光繼續(xù)作用10～15秒，熄燈后結(jié)束一次測(cè)試。大鼠所在支臂成為下一次測(cè)試的起點(diǎn)，兩次測(cè)試時(shí)間間隔為30秒或休息1分鐘后再進(jìn)行第2次測(cè)試，依次重復(fù)，測(cè)試至達(dá)到連續(xù)9/10標(biāo)準(zhǔn)。

(2) 隨機(jī)不休息法：安全區(qū)以無(wú)規(guī)則的次序變換，開(kāi)始時(shí)對(duì)大白鼠所在支臂與另一支臂通電，動(dòng)物在電擊下逃竄至燈光區(qū)后再保持10秒或30秒為一次測(cè)試。然后動(dòng)物所在支臂成為下次測(cè)試的起始位置進(jìn)行下一次測(cè)試。

(3) 順序法：三臂末端按Ⅰ→Ⅱ→Ⅲ→Ⅰ臂輪流作為起步區(qū)或安全區(qū)。

這些方法可分為兩類：①每天固定訓(xùn)練次數(shù)，一般為20次，連續(xù)訓(xùn)練3～4天。大鼠通常能在此期間達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)。②不固定訓(xùn)練次數(shù)，采用分段連續(xù)訓(xùn)練法，即每訓(xùn)練10次，休息1分鐘，直到大鼠學(xué)會(huì)為止，訓(xùn)練在1天內(nèi)完成。一般多采用第一種方法。

6.5 記憶保持（再現(xiàn)）測(cè)試

在學(xué)習(xí)測(cè)試后的24小時(shí)、48小時(shí)、1周和30天，再以相同的方法測(cè)試至達(dá)到9/10的標(biāo)準(zhǔn)。正確反應(yīng)的次數(shù)被定義為A，以A/10表示記憶的保持能力。這個(gè)值越高，說(shuō)明記憶力越好。

七、測(cè)試指標(biāo)

(1) 達(dá)標(biāo)所需的訓(xùn)練次數(shù)(電擊次數(shù)、反應(yīng)次數(shù)、測(cè)試次數(shù))：表示動(dòng)物在學(xué)習(xí)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)前所需的測(cè)試數(shù)，反映其空間分辨反應(yīng)的學(xué)習(xí)記憶成績(jī)。

(2) 達(dá)標(biāo)所需的天(日)數(shù)：記錄每只大鼠達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)所用的天數(shù)。

(3) 錯(cuò)誤反應(yīng)次數(shù)(errors number EN)：一個(gè)實(shí)驗(yàn)日完成所有反應(yīng)中錯(cuò)誤反應(yīng)的次數(shù)。

(4) 全天總反應(yīng)時(shí)間(total reaction time TRT)：動(dòng)物的反應(yīng)時(shí)(潛伏期)，指從信號(hào)燈亮開(kāi)始至大鼠第一次逃至燈亮區(qū)為止所耗的時(shí)間。全天總反應(yīng)時(shí)是一個(gè)實(shí)驗(yàn)日(全天)完成所有反應(yīng)(包括正確反應(yīng)和錯(cuò)誤反應(yīng))所需的時(shí)間。

(5) 主動(dòng)回避率：大鼠在燈亮但未通電的5秒內(nèi)完成逃避反應(yīng)的次數(shù)占總反應(yīng)次數(shù)的百分比。安全區(qū)燈亮，電刺激尚未開(kāi)始時(shí)，大鼠即逃往安全區(qū)表明大鼠已經(jīng)形成了明暗辨別條件反射(主動(dòng)回避反應(yīng))。

(6) 正確反應(yīng)率(行為正確率)：正確反應(yīng)數(shù)占總測(cè)試數(shù)的百分比。

(7) 全組正確率：學(xué)會(huì)的動(dòng)物數(shù)占該組動(dòng)物總數(shù)的百分比。

(8) 3天學(xué)會(huì)率：在第3天達(dá)到學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物數(shù)占該組動(dòng)物總數(shù)的百分比。

八、注意事項(xiàng)：

嚴(yán)格篩選動(dòng)物，淘汰對(duì)電擊耐受性差或?qū)﹄姄舨幻舾械膭?dòng)物。

操作規(guī)范，盡量由專人操作，減少誤差。

實(shí)驗(yàn)環(huán)境安靜，光線適宜。盡量在每天相同時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

​刺激的電壓強(qiáng)度一般為30～70Ｖ，延時(shí)為3～5秒，電柵的導(dǎo)電性能要穩(wěn)定。隨時(shí)清理動(dòng)物糞便，防止電柵短路。