心理應(yīng)激是指機(jī)體在某種環(huán)境刺激（應(yīng)激源）作用下引起的心理生理機(jī)能改變的過程，動物慢性應(yīng)激能較真實的模擬出人類生活的應(yīng)激情境，常用于研究人類心理生理應(yīng)激反應(yīng)以及模擬人類情緒類疾病的臨床發(fā)病特點。慢性束縛應(yīng)激（Chronic restraint stress, CRS）、慢性情緒應(yīng)激（Chronic emotional stress, CES）以及慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激（Chronic unpredictable mild stress, CUMS）是常見的慢性心理應(yīng)激造模方法，常用于建立動物的焦慮樣、抑郁樣等情緒類疾病模型。大量文獻(xiàn)報道，CRS 和 CES能同時誘導(dǎo)大鼠的焦慮和抑郁樣行為，而CUMS 則主要用于建立大小鼠的抑郁模型。

本實驗采用 CRS（3h、6h）、CES為焦慮性抑郁大鼠的心理應(yīng)激造模方法，以焦慮模型大鼠和抑郁模型大鼠為對照，并分別從14 d、21 d、28 d 三個時間點進(jìn)行比較分析，通過檢測各心理應(yīng)激模型大鼠的行為學(xué)和腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)，優(yōu)選出一種最佳的焦慮性抑郁心理應(yīng)激造模方法。

動物造模

• 焦慮模型

采用不確定性空瓶飲水應(yīng)激焦慮模型，進(jìn)行定時喂水訓(xùn)練7 d。定時喂水訓(xùn)練為每日 2 次，時間分別為 8:00--8:10 和18:00--18:10，此兩個時間段內(nèi)給動物飲水，其他時間不再給水。7 d 后開始進(jìn)行應(yīng)激實驗，在上述兩個時間段內(nèi)隨機(jī)選取一個作為空瓶應(yīng)激時間點，給動物以空水瓶誘發(fā)其情緒應(yīng)激，另一個時間段給動物飲水，此應(yīng)激持續(xù) 14d。

• 抑郁模型

采用慢性不可預(yù)見性應(yīng)激抑郁模型，給予動物持續(xù) 21d的慢性溫和不可預(yù)測性應(yīng)激，刺激因素包括：4 ℃冰水浴或40 ℃溫水�。�4min），禁食或禁水24h，傾籠24 h，24 h光照或黑暗， 電擊足底（50 V，3 min），夾尾（1 min），每天給予1-2種應(yīng)激，同種應(yīng)激不連續(xù)出現(xiàn)，其中同種軀體應(yīng)激一周一次，造模期間動物均孤籠飼養(yǎng)。

• 焦慮性抑郁模型

采用3種不同的焦慮性抑郁模型，均為心理應(yīng)激方法。國內(nèi)外文獻(xiàn)表明此 3種方法均能使動物產(chǎn)生焦慮和抑郁樣行為。
① 慢性束縛應(yīng)激3h：將動物束縛于特制的束縛器上，每日上午束縛1次，每次3h。
② 慢性束縛應(yīng)激6h：將動物束縛于特制的束縛器上，每天9:00--15:00進(jìn)行束縛，共6h。
③ 慢性情緒應(yīng)激：動物每籠4只，應(yīng)激方法包括光照或黑暗24h，擁擠24h，孤養(yǎng)24h，每天下午3:00-6:00 禁食或禁水1h，電擊（20次，持續(xù)5s，10mA，間隔30s），傾籠24h，每天采用 1種應(yīng)激，同種應(yīng)激不連續(xù)出現(xiàn)。

動物行為學(xué)檢測

• 高架十字迷宮實驗

將大鼠放入迷宮的中央平臺處，使其頭部正對封閉臂，釋放后記錄以下指標(biāo)：① 進(jìn)入開放臂次數(shù)（OE）；② 進(jìn)入封閉臂次數(shù)（CE）；③ 進(jìn)入開放臂時間（OT）；④ 進(jìn)入封閉臂時間（CT）。由上述指標(biāo)計算出：① 進(jìn)入開放臂的比例（OE%）：OE/( OE +CE)×100%；② 開放臂停留時間比例（OT%）：OT/( OT + CT)×100%。每只大鼠測試5min。

• 曠場測試

將大鼠放入到一個長寬高分別為80 cm、80 cm、40 cm 的黑色敞箱中，敞箱底面平均劃分為 25 個小方格。實驗前 30 min 將待測大鼠放入測試房間，大鼠從敞箱中央放入，觀察記錄大鼠4 min內(nèi)水平運動格數(shù)以及垂直豎立次數(shù)，計算水平和垂直得分的總和。

• 場景恐懼測試

于測試前1 d 對大鼠進(jìn)行訓(xùn)練，大鼠在斯金納箱適應(yīng) 2 min 后，給予 30 s 的噪音（5k Hz, 75 d B），在噪音結(jié)束最后 2 s 同時給予電擊（50 V），大鼠繼續(xù)呆在箱內(nèi) 30 s，然后取出放回籠內(nèi)，24 h 后進(jìn)行測試，將大鼠放入斯金納箱，2 min 后給予 60 s 的噪音，記錄 60 s 內(nèi)大鼠的不動（freezing）時間百分比。  

• 強(qiáng)迫游泳實驗

將大鼠放入高、直徑分別為50 cm、20 cm 的圓柱形水缸中，水深約 40 cm，水溫保持在（25 ± 2）℃。實驗開始后 1 min 為適應(yīng)時間，適應(yīng)結(jié)束后記錄 5 min內(nèi)大鼠的不動時間（大鼠兩前爪停止游動，身體呈漂浮狀態(tài)記為不動）。

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