Simoa單分子免疫陣列分析技術(shù)是目前市面上最靈敏的蛋白分子檢測(cè)技術(shù)之一，可以檢測(cè)單個(gè)蛋白分子，靈敏度達(dá)到飛克級(jí)別。依托Simoa超高靈敏檢測(cè)平臺(tái)，可對(duì)外周血中低含量神經(jīng)因子進(jìn)行精準(zhǔn)定量，加速神經(jīng)領(lǐng)域生物標(biāo)志物的研究進(jìn)程，助力中國(guó)人群隊(duì)列研究。

由Quanterix公司主辦，SBC共同參與的N4PE免費(fèi)測(cè)樣活動(dòng)進(jìn)入尾聲，檢測(cè)報(bào)告正在陸續(xù)發(fā)出，今天就講講如何解讀這些報(bào)告中的數(shù)據(jù)圖表。

四個(gè)檢測(cè)指標(biāo)

• NfL，神經(jīng)元的細(xì)胞質(zhì)中間絲蛋白，與微管和微絲一起形成神經(jīng)元細(xì)胞骨架。Nf-L是與腦損傷、腦中風(fēng)、多發(fā)性硬化癥、癡呆和其他神經(jīng)退行性疾病相關(guān)神經(jīng)元損傷的生物標(biāo)志物，是研究神經(jīng)性疾病最有力的工具之一。
• Aβ40/Aβ42，由淀粉樣前體蛋白經(jīng) β-和 γ-分泌酶的蛋白水解作用而產(chǎn)生的含有40/42個(gè)氨基酸的多肽。Aβ的沉積不僅與神經(jīng)元的退行性病變有關(guān)，而且可以激活一系列病理事件，包括星型膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的激活、血腦屏障的破環(huán)和微循環(huán)的變化等，是阿爾茨海默病人腦內(nèi)老年斑周邊神經(jīng)元變性和死亡的主要原因。
• GFAP，膠質(zhì)纖維酸性蛋白，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的蛋白，與多種疾病相關(guān)，如創(chuàng)傷性腦損傷、中風(fēng)、腦腫瘤等。近期揭示其在阿爾茨海默早期出現(xiàn)異常升高，具有作為疾病早期生物標(biāo)志物的潛在可能。

樣本的復(fù)核，試劑盒信息以及樣本前處理信息

由于樣本中殘余的細(xì)胞碎片，較大細(xì)胞器以及密度較大的多聚體可能會(huì)影響免疫反應(yīng)的充分進(jìn)行以及后續(xù)的圖像解析，所以在上樣之前每個(gè)樣本在充分解凍后會(huì)進(jìn)行10000g 5min的離心來去除這些物質(zhì)。

標(biāo)曲信息

標(biāo)曲相當(dāng)于一個(gè)實(shí)驗(yàn)的“尺子“，用來計(jì)算測(cè)得樣本的真實(shí)濃度，標(biāo)曲的好壞是衡量一次定量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的重要指標(biāo)。

以圖中的NfL標(biāo)曲為例，首先是每個(gè)濃度點(diǎn)的CV值，也就是重復(fù)測(cè)量的離散程度，CV小于20%即認(rèn)為合格，實(shí)際上大多數(shù)標(biāo)曲點(diǎn)的CV是小于10%的，說明標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)的精準(zhǔn)性還是很高的。其次是R2，即標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸系數(shù)，也就是每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)曲線的離散程度，R2越高說明標(biāo)曲的擬合度越好，這把“尺子”的衡量力就越好。此外，標(biāo)曲的橫坐標(biāo)是濃度，單位是pg/mL，縱坐標(biāo)是AEB，是Average Enzyme per Bead的縮寫，即平均每個(gè)磁珠上攜帶的酶的個(gè)數(shù)。AEB是Simoa磁珠平臺(tái)的信號(hào)強(qiáng)度單位，當(dāng)形成磁珠-待檢物-酶的復(fù)合物時(shí)，我們認(rèn)為磁珠攜帶了酶，是陽(yáng)性磁珠，但是每個(gè)反應(yīng)中會(huì)有數(shù)萬的磁珠參與反應(yīng)，那么平均每個(gè)磁珠上攜帶的酶的個(gè)數(shù)究竟是0.1還是1還是10，會(huì)有軟件通過數(shù)字/模擬算法得出。簡(jiǎn)而言之，AEB實(shí)際就是Simoa平臺(tái)中響應(yīng)信號(hào)強(qiáng)度的表達(dá)方式。

LOD（檢出下限）以及LLOQ（定量檢測(cè)下限）

每個(gè)因子均標(biāo)有其對(duì)應(yīng)的LOD和LLOQ，飛克級(jí)別的靈敏度是足以將正常人群中的基線水平進(jìn)行絕對(duì)定量檢測(cè)。

質(zhì)控結(jié)果

每次實(shí)驗(yàn)會(huì)設(shè)置兩個(gè)質(zhì)控，分別為高濃和低濃質(zhì)控，各重復(fù)兩次。質(zhì)控不僅能預(yù)示此次實(shí)驗(yàn)的精確度（重復(fù)之間的CV%），還能預(yù)實(shí)準(zhǔn)確度。

樣本結(jié)果

下圖中淡黃色區(qū)域分別為四個(gè)神經(jīng)因子指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，濃度為pg/mL。另外，最終濃度是乘以稀釋倍數(shù)之后的濃度。

以上數(shù)據(jù)來自Quanterix，共進(jìn)行了75個(gè)血漿/血清樣本、每個(gè)樣本4個(gè)神經(jīng)因子的檢測(cè)，檢出率高達(dá)95%。