(一)實(shí)驗(yàn)材料
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康成年雄性小鼠(30 - 35g)或大鼠(200 - 250g),分組飼養(yǎng)。
2.實(shí)驗(yàn)藥物生理鹽水(對(duì)照)與鎮(zhèn)痛藥物(如嗎啡,l0mg/kg,皮下注射)。
3.帶27((大鼠)或30G(小鼠)針頭的1.0ml注射器。
4.帶自動(dòng)計(jì)時(shí)器或秒表的尾閃試驗(yàn)裝置。
5.限制大鼠或小鼠活動(dòng)的包括毛巾或塑料小筒。
(二)實(shí)驗(yàn)步驟
1、從動(dòng)物房取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,稱重后,讓動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)30min,將對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組分開;
2、藥物準(zhǔn)備對(duì)照組(生理鹽水等)及給藥組(如嗎啡等,計(jì)算藥物濃度,如大鼠按2mg,kg紿藥,小鼠按10mg/kg給藥);
3、測(cè)定動(dòng)物的基礎(chǔ)反應(yīng)潛伏期( baseline latencies) 用尾閃試驗(yàn)測(cè)試儀(即在一小孔的平板下有一個(gè)發(fā)熱光源,將大鼠(尾尖部前50mm左右)或小鼠(尾尖部前約15mm)的尾部放在小孔的上方,啟動(dòng)發(fā)熱光源開始計(jì)時(shí),直到尾巴躲避為止,調(diào)整光源的強(qiáng)度,設(shè)大多數(shù)鼠的尾部躲閃時(shí)間在3- 4s,如果沒有躲避反射則把試驗(yàn)終止時(shí)間設(shè)定為10s,以免燒傷;
4、藥物注射將不同的藥物包括對(duì)照溶液,隨機(jī)順序注射到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。注意計(jì)算好給藥時(shí)間與試驗(yàn)測(cè)試的時(shí)間間隔,試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間,同時(shí)給出足夠的機(jī)動(dòng)時(shí)間(如實(shí)驗(yàn)記錄,藥物更換等),必要時(shí)讓另外的人注射對(duì)照劑或?qū)嶒?yàn)藥品(盲法試驗(yàn));
5、在給藥后15,30及60min時(shí),即測(cè)試尾閃反應(yīng),將動(dòng)物放到尾閃測(cè)試板并把其尾部放到光源小孔上,即開始計(jì)時(shí),觀察動(dòng)物尾部躲避反應(yīng)的時(shí)間,或直到終止(cut-off)時(shí)間。注意一次試驗(yàn)只測(cè)1個(gè)時(shí)間點(diǎn),而不是3個(gè)時(shí)間點(diǎn);
6、將動(dòng)物放到尾閃測(cè)試儀上到反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)的潛伏期或終止實(shí)驗(yàn)時(shí)間記錄下來,在所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物完成測(cè)試后(一般每組至少8個(gè)數(shù)據(jù)),分組將其平均并作統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估。
尾閃試驗(yàn)時(shí),也常用到一種稱為最大可能效應(yīng)百分比(percent max.mum possible effect,MPE,%),即:MPE(%)=[(給藥后一基礎(chǔ)反應(yīng)),(終止時(shí)間一基礎(chǔ)反應(yīng))] x 100這里基礎(chǔ)反應(yīng)與給藥后均指反應(yīng)潛伏期,所有動(dòng)物在測(cè)試前,應(yīng)該先測(cè)定一下它的反應(yīng)潛伏期(基礎(chǔ)反應(yīng)反應(yīng)潛伏期);給藥后反應(yīng)潛伏期是指動(dòng)物接受藥物(包括對(duì)照用生理鹽水或其他載體)注射(或灌注)后實(shí)驗(yàn)中的反應(yīng)潛伏期;終止時(shí)間是指給藥后動(dòng)物不能對(duì)熱作出反應(yīng)而終止試驗(yàn)的時(shí)間(10s)。
(三)注意事項(xiàng)
1、如果給藥前或?qū)φ战M動(dòng)物測(cè)不到反應(yīng)或反應(yīng)潛伏期很靠近試驗(yàn)終止時(shí)間,說明刺激強(qiáng)度太弱(光源溫度設(shè)定較低),必須加大刺激強(qiáng)度。
2、必須保持所有的實(shí)驗(yàn)程痔一致,盡量輕巧抓取動(dòng)物,讓動(dòng)物有足夠的時(shí)間適應(yīng)實(shí)驗(yàn)者的氣味及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,否則可造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的明顯波動(dòng)或不能重復(fù)。
3、刺激光源的強(qiáng)弱,即刺激的強(qiáng)度太高或太弱均可使試驗(yàn)結(jié)果變化較大,而且高強(qiáng)度的刺激可能掩蓋實(shí)驗(yàn)藥物的效果,因此,用藥前的基礎(chǔ)測(cè)試非常重要。
4、為了減少實(shí)驗(yàn)的誤差,一般適量限制動(dòng)物的活動(dòng),如用毛巾裹住動(dòng)物或把它們放入小筒中,這兩種方法掌握不當(dāng)都可造成動(dòng)物的壓抑( stress)行為而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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