三陰乳腺癌(TNBC)缺乏表達(dá)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR),或人類表皮生長(zhǎng)因子受體2 (HER2),占所有確診乳腺癌的10-15%, 且預(yù)后差，5年內(nèi)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)高。PD-L1是患者選擇免疫治療的重要生物標(biāo)志物，TNBC腫瘤免疫微環(huán)境(TIME)中PD-L1表達(dá)細(xì)胞的詳細(xì)空間特征可能會(huì)進(jìn)一步加深我們對(duì)不同PD-L1+細(xì)胞表型的重要貢獻(xiàn)，及其與結(jié)果關(guān)聯(lián)的理解。

多重免疫熒光(mIF)代表了一種先進(jìn)的檢測(cè)方式，使用獨(dú)特的光譜成像技術(shù)識(shí)別腫瘤免疫微環(huán)境的多標(biāo)記免疫表型，為深入研究腫瘤微環(huán)境中的空間特征提供了可能性。大量轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究者也對(duì)其方法學(xué)的可靠性和穩(wěn)定性進(jìn)行了驗(yàn)證，證實(shí)了多色免疫熒光和免疫組織化學(xué)(IHC)技術(shù)定量的一致性。[1,2]

Yeong 等人[1]對(duì)比了使用傳統(tǒng)IHC定量PD-L1表達(dá)和多色免疫熒光下PD-L1的定量一致性，證實(shí)了mIHC/IF同時(shí)檢測(cè)和量化多個(gè)抗體克隆的PD-L1標(biāo)記，并允許準(zhǔn)確評(píng)估腫瘤和免疫細(xì)胞,是一種非常有前景的臨床研究工具。

用mIHC/IF標(biāo)記的TNBC組織切片的代表性圖像

來自澳大利亞的Millar教授團(tuán)隊(duì)[3]進(jìn)一步研究了TNBC患者中表達(dá)PD-L1的免疫細(xì)胞的表型，并確定它們與總生存期(OS)和乳腺癌特異性生存期(BCSS)的關(guān)系。研究中收集了來自悉尼圣喬治醫(yī)院(n = 244)的TNBC患者樣本進(jìn)行了回顧性研究，使用基于Akoya Biosciences Vectra Polaris™平臺(tái)的多重免疫熒光(mIF)技術(shù)評(píng)估CD3、CD8、CD20、CD68、PD-1、PD-L1、FOXP3和泛細(xì)胞角蛋白(pan-CK)及DAPI的9色熒光染色，使用InForm 軟件進(jìn)行了光譜拆分和樣本自發(fā)熒光的去除，使用QuPath進(jìn)行定量分析。

CD3、CD8、CD20、CD68、PD-1、PD-L1、FOXP3、泛細(xì)胞角蛋白(pan-CK)和DAPI的9色染色和HE的對(duì)比。

9色免疫熒光的詳細(xì)染色方案

統(tǒng)計(jì)分析顯示對(duì)比整體群體，在接受化療的病人 (HR 0.56, 95% CI 0.33–0.95, p = 0.030)中，高CD68+ PD-L1+基質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù)與改善預(yù)后相關(guān)。尤其是在乳腺癌特異性生存期的預(yù)測(cè)上，可以顯著提供僅使用PD-L1單一數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性(HR 0.47, 95% CI 0.25–0.88, p = 0.018)。

統(tǒng)計(jì)分析生存率發(fā)現(xiàn)對(duì)比使用PD-L1，高表達(dá)的CD68+ PD-L1+ 巨噬細(xì)胞數(shù)量可以有效提供預(yù)后預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。CD68+ PD-L1+的定量分析可以為臨床治療提供有用的預(yù)后信息，以識(shí)別預(yù)后良好或不良的患者亞組。

綜上，使用9色免疫熒光染色，準(zhǔn)確識(shí)別T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞，并對(duì)其PD-1/PD-L1表達(dá)進(jìn)行分析。間質(zhì)中的大量雙染色CD68+ PD-L1+巨噬細(xì)胞，可以有效區(qū)分TNBC患者的一個(gè)亞組，輔助改善該亞組的預(yù)后，提高僅使用PD-L1+對(duì)BCSS的預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。這種預(yù)后免疫表型為進(jìn)一步分層TNBC預(yù)后提供了有用的數(shù)據(jù)，為治療方案提供參考。

什么是Phenoptics解決方案？

Phenoptics解決方案，采用特色的MOTiF™ 快速全組織片掃描，是我們擁有專利和經(jīng)過驗(yàn)證的新一代多光譜成像技術(shù)。采用Phenoptics流線型的工作流程，可以幫助您比以往更好地理解驅(qū)動(dòng)疾病的生物學(xué)。您能夠識(shí)別更多的細(xì)胞表型，評(píng)估它們的功能狀態(tài)，通過細(xì)胞與細(xì)胞的相互作用及宏觀組織結(jié)構(gòu)的分析，描繪整個(gè)組織切片的空間關(guān)系。

[參考文獻(xiàn)]
1.  Yeong J, et al.Multiplex immunohistochemistry/immunofluorescence (mIHC/IF) for PD-L1 testing in triple-negative breast cancer: a translational assay compared with conventional IHC. Journal of Clinical Pathology 2020;73:557-562.
2.  Lu S, et al. Comparison of Biomarker Modalities for Predicting Response to PD-1/PD-L1 Checkpoint Blockade: A Systematic Review and Meta-analysis. JAMA Oncol. 2019;5(8):1195–1204. doi:10.1001/jamaoncol.2019.1549
3.  Wang, J., et al. Multiplexed immunofluorescence identifies high stromal CD68+PD-L1+ macrophages as a predictor of improved survival in triple negative breast cancer. Sci Rep 11, 21608 (2021). https://doi.org/10.1038/s41598-021-01116-6