化合物純度、溶劑溶解度檢測方法
產(chǎn)品檢測方法一般有核磁共振氫譜 (HNMR)，液質(zhì)聯(lián)用 (LCMS)，高效液相色譜 (HPLC)。我們一般通過核磁共振確定結(jié)構(gòu)式 (產(chǎn)品是否正確) 和大概純度 (是否含雜質(zhì)及雜質(zhì)大概比例)，通過 LCMS 或 HPLC 測定確定產(chǎn)品具體純度 (產(chǎn)品需要有紫外吸收)。
■ 核磁共振 (NMR)
核磁共振 (Nuclear magnetic resonance)，簡稱 NMR，是磁矩不為零的原子核，在外磁場作用下自旋能級發(fā)生塞曼分裂 (Zeeman effect)，共振吸收某一定頻率的射頻輻射的物理過程。核磁共振波譜學是光譜學的一個分支，其共振頻率在射頻波段，相應(yīng)的躍遷是核自旋在核塞曼能級上的躍遷。主要用于鑒定分子的結(jié)構(gòu)，樣品的純度。
NMR 常用的溶劑：一些小極性的化合物 (脂肪長鏈的，脂肪環(huán)的) 一般用 chloroform 做溶劑，甾體類的化合物多用氘代吡啶做溶劑。核磁檢測常用氘代溶劑有：D2O，氘代丙酮，氘代 DMSO，Chloroform-d ，氘代甲醇，氘代苯，氘代乙腈，氘代吡啶等。我們的產(chǎn)品中一些鹽、大極性的化合物可以選用氘代 DMSO，重水，氘代甲醇做溶劑。
核磁共振氫譜 (HNMR)：HNMR 是用來測定分子中 H 原子種類和個數(shù)比的。HNMR 中，峰的數(shù)量就是 H 的化學環(huán)境 (即 H 的種類) 的數(shù)量，而峰的相對高度，就是對應(yīng)的處于某種化學環(huán)境中的 H 原子的數(shù)量，不同化學環(huán)境中的 H，其峰的位置是不同的。例：CH3CH2OH 中，有 3 種 H，則有 3 個峰，強度比為：3:2:1。CH3OCH3 中，只有一種 H，則有 1 個峰。CH2=CH-CH3 中，有三種 H，個數(shù)比為：2:1:3。
1、產(chǎn)品結(jié)構(gòu)式，分子式及分子量，通過分子式判斷 H 原子總數(shù)；
2、H 原子化學位移，體現(xiàn)的是 H 原子種類，化學位移單位為 ppm；
3、樣品檢測用的氘代試劑溶劑峰；
4、氘代試劑中的水峰；
5、不同化學位移情況下 H 原子個數(shù)分布，個數(shù)總和與結(jié)構(gòu)式中化學式中 H 原子個數(shù) 12H 一致，化學位移 11.05 ppm 為活潑 H，積分值可能不足 1；
6、譜圖右側(cè)為檢測參數(shù)，包括儀器信息，檢測溫度，掃描次數(shù)等。
■ LCMS 檢測
質(zhì)譜 (MS) 是用電場和磁場將運動的離子 (帶電荷的原子、分子或分子碎片，有分子離子、同位素離子、碎片離子、重排離子、多電荷離子、亞穩(wěn)離子、負離子和離子－分子相互作用產(chǎn)生的離子) 按它們的質(zhì)荷比分離后進行檢測的方法。測出離子準確質(zhì)量即可確定離子的化合物組成。質(zhì)譜是純物質(zhì)鑒定的最有力工具之一，其中包括相對分子量測定、化學式的確定及結(jié)構(gòu)鑒定等，具有靈敏度高，樣品用量少，分析速度快，分離和鑒定同時進行等優(yōu)點。
質(zhì)譜一般與高效液相色譜 (HPLC) 或氣相色譜 (GC) 聯(lián)用，對樣品組分分離，分別測定各組分的分子量與百分比。與高效液相色譜 (HPLC) 聯(lián)用，稱為 LCMS (Liquid chromatography-mass spectrometry)。
LCMS 譜圖分析 (高效液相 HPLC 與質(zhì)譜 MS 聯(lián)用)：
1、LCMS 第一/二個曲線圖，為檢測器 DAD 紫外吸收高效液相 HPLC 圖，檢測波長一般是 214 nm/254 nm，可作為純度參考；
2、第三個曲線圖，為 MS 信號流，顯示 MS 信號強弱，可能因信號噪音出現(xiàn)基線不平現(xiàn)象，不作為純度參考；
3、第四個曲線圖，為提取的含目標產(chǎn)品 MS 信號圖，有出峰表示有目標產(chǎn)品，無出峰表示無目標產(chǎn)品；
4、MS 質(zhì)譜圖，MS 信號顯示目標分子量 M+1 峰，或 M+Na 峰，以及電離產(chǎn)生的碎片離子峰。
質(zhì)譜 MS 分析：橫坐標是質(zhì)荷比，即離子的質(zhì)量和質(zhì)子所帶的電荷之比�？v坐標是離子流的強度，最高峰為基峰。
1、一般 MS 圖譜中的分子離子峰的值應(yīng)為 EM+1 (Exact Mass)，即 [M+H]+，例如醚、酯，胺、酰胺、腈化物、氨基酸酯等；
2、常見的加合離子有 [M+Na]+，[M+K]+，[2M+H]+，[2M+Na]+，[M+H]/2+ 等；
3、加有緩沖溶液或溶劑的體系還可引進 [M+X+H]+，(X=溶劑或緩沖溶液中的陽離子) 如：用堿性體系方法分析時常見的加合離子有 [M+NH4]+ (如堿性體系用的銨鹽緩沖溶液)；
4、負離子檢測時，一般 MS 圖譜中的分子離子峰的值應(yīng)為 EM-1 (Exact Mass)，即 [M-H]-；加有緩沖溶液或溶劑的體系還可引進 [M+X-H]-，(X=溶劑或緩沖溶液中的陰離子)。
■ 高效液相色譜 HPLC
高效液相色譜法 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) 又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。
根據(jù)流動相和固定相相對極性不同，液相色譜分為正相色譜 (NP-HPLC) 和反相色譜 (RP-HPLC)。RP-HPLC，可分離產(chǎn)品與雜質(zhì)，一般用于純度測定。NP-HPLC 是采用極性固定相 (如帶有二醇基、氨基、和氰基的固定相及硅膠、三氧化二鋁等)、非極性流動相 (如正己烷等) 的分離方法。這是一種根據(jù)分子的極性大小將其分開的液相色譜技術(shù)。我們一般用于手性異構(gòu)體的純度測定，如 ee (enantiomeric excess) 值和 de (Diastereomeric excesses) 值，也就是手性 HPLC。手性 HPLC 檢測需要對映異構(gòu)體，消旋體，或非對映異構(gòu)體進行定位對照檢測。
反相 RP-HPLC
一般作為純度檢測：黑色曲線為空白對照，藍色曲線為樣品檢測液相圖，Rel.Area (相對峰面積) 為純度。
正相 NP-HPLC
一般用于手性純度，ee 值或 de 值檢測。
以上是我們常規(guī)的檢測方法。針對不同的產(chǎn)品，我們根據(jù)結(jié)構(gòu)性質(zhì)來選擇合適的方法，包括是否有紫外吸收，是否含手性中心，不同溶劑溶解性如何等等。部分產(chǎn)品如金屬絡(luò)合物、聚合物、無機鹽等不適合以上常規(guī)方法檢測，可以參考相關(guān)文獻測定紅外、紫外吸光度、滴定或者選擇其它檢測方式
■ 核磁共振 (NMR)
核磁共振 (Nuclear magnetic resonance)，簡稱 NMR，是磁矩不為零的原子核，在外磁場作用下自旋能級發(fā)生塞曼分裂 (Zeeman effect)，共振吸收某一定頻率的射頻輻射的物理過程。核磁共振波譜學是光譜學的一個分支，其共振頻率在射頻波段，相應(yīng)的躍遷是核自旋在核塞曼能級上的躍遷。主要用于鑒定分子的結(jié)構(gòu)，樣品的純度。
NMR 常用的溶劑：一些小極性的化合物 (脂肪長鏈的，脂肪環(huán)的) 一般用 chloroform 做溶劑，甾體類的化合物多用氘代吡啶做溶劑。核磁檢測常用氘代溶劑有：D2O，氘代丙酮，氘代 DMSO，Chloroform-d ，氘代甲醇，氘代苯，氘代乙腈，氘代吡啶等。我們的產(chǎn)品中一些鹽、大極性的化合物可以選用氘代 DMSO，重水，氘代甲醇做溶劑。
核磁共振氫譜 (HNMR)：HNMR 是用來測定分子中 H 原子種類和個數(shù)比的。HNMR 中，峰的數(shù)量就是 H 的化學環(huán)境 (即 H 的種類) 的數(shù)量，而峰的相對高度，就是對應(yīng)的處于某種化學環(huán)境中的 H 原子的數(shù)量，不同化學環(huán)境中的 H，其峰的位置是不同的。例：CH3CH2OH 中，有 3 種 H，則有 3 個峰，強度比為：3:2:1。CH3OCH3 中，只有一種 H，則有 1 個峰。CH2=CH-CH3 中，有三種 H，個數(shù)比為：2:1:3。
乙醇 (CH3CH2OH) 的 HNMR
核磁氫譜譜圖解析：1、產(chǎn)品結(jié)構(gòu)式，分子式及分子量，通過分子式判斷 H 原子總數(shù)；
2、H 原子化學位移，體現(xiàn)的是 H 原子種類，化學位移單位為 ppm；
3、樣品檢測用的氘代試劑溶劑峰；
4、氘代試劑中的水峰；
5、不同化學位移情況下 H 原子個數(shù)分布，個數(shù)總和與結(jié)構(gòu)式中化學式中 H 原子個數(shù) 12H 一致，化學位移 11.05 ppm 為活潑 H，積分值可能不足 1；
6、譜圖右側(cè)為檢測參數(shù)，包括儀器信息，檢測溫度，掃描次數(shù)等。
■ LCMS 檢測
質(zhì)譜 (MS) 是用電場和磁場將運動的離子 (帶電荷的原子、分子或分子碎片，有分子離子、同位素離子、碎片離子、重排離子、多電荷離子、亞穩(wěn)離子、負離子和離子－分子相互作用產(chǎn)生的離子) 按它們的質(zhì)荷比分離后進行檢測的方法。測出離子準確質(zhì)量即可確定離子的化合物組成。質(zhì)譜是純物質(zhì)鑒定的最有力工具之一，其中包括相對分子量測定、化學式的確定及結(jié)構(gòu)鑒定等，具有靈敏度高，樣品用量少，分析速度快，分離和鑒定同時進行等優(yōu)點。
質(zhì)譜一般與高效液相色譜 (HPLC) 或氣相色譜 (GC) 聯(lián)用，對樣品組分分離，分別測定各組分的分子量與百分比。與高效液相色譜 (HPLC) 聯(lián)用，稱為 LCMS (Liquid chromatography-mass spectrometry)。
LCMS 譜圖分析 (高效液相 HPLC 與質(zhì)譜 MS 聯(lián)用)：
1、LCMS 第一/二個曲線圖，為檢測器 DAD 紫外吸收高效液相 HPLC 圖，檢測波長一般是 214 nm/254 nm，可作為純度參考；
2、第三個曲線圖，為 MS 信號流，顯示 MS 信號強弱，可能因信號噪音出現(xiàn)基線不平現(xiàn)象，不作為純度參考；
3、第四個曲線圖，為提取的含目標產(chǎn)品 MS 信號圖，有出峰表示有目標產(chǎn)品，無出峰表示無目標產(chǎn)品；
4、MS 質(zhì)譜圖，MS 信號顯示目標分子量 M+1 峰，或 M+Na 峰，以及電離產(chǎn)生的碎片離子峰。
質(zhì)譜 MS 分析：橫坐標是質(zhì)荷比，即離子的質(zhì)量和質(zhì)子所帶的電荷之比�？v坐標是離子流的強度，最高峰為基峰。
1、一般 MS 圖譜中的分子離子峰的值應(yīng)為 EM+1 (Exact Mass)，即 [M+H]+，例如醚、酯，胺、酰胺、腈化物、氨基酸酯等；
2、常見的加合離子有 [M+Na]+，[M+K]+，[2M+H]+，[2M+Na]+，[M+H]/2+ 等；
3、加有緩沖溶液或溶劑的體系還可引進 [M+X+H]+，(X=溶劑或緩沖溶液中的陽離子) 如：用堿性體系方法分析時常見的加合離子有 [M+NH4]+ (如堿性體系用的銨鹽緩沖溶液)；
4、負離子檢測時，一般 MS 圖譜中的分子離子峰的值應(yīng)為 EM-1 (Exact Mass)，即 [M-H]-；加有緩沖溶液或溶劑的體系還可引進 [M+X-H]-，(X=溶劑或緩沖溶液中的陰離子)。
■ 高效液相色譜 HPLC
高效液相色譜法 (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) 又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。
根據(jù)流動相和固定相相對極性不同，液相色譜分為正相色譜 (NP-HPLC) 和反相色譜 (RP-HPLC)。RP-HPLC，可分離產(chǎn)品與雜質(zhì)，一般用于純度測定。NP-HPLC 是采用極性固定相 (如帶有二醇基、氨基、和氰基的固定相及硅膠、三氧化二鋁等)、非極性流動相 (如正己烷等) 的分離方法。這是一種根據(jù)分子的極性大小將其分開的液相色譜技術(shù)。我們一般用于手性異構(gòu)體的純度測定，如 ee (enantiomeric excess) 值和 de (Diastereomeric excesses) 值，也就是手性 HPLC。手性 HPLC 檢測需要對映異構(gòu)體，消旋體，或非對映異構(gòu)體進行定位對照檢測。
反相 RP-HPLC
一般作為純度檢測：黑色曲線為空白對照，藍色曲線為樣品檢測液相圖，Rel.Area (相對峰面積) 為純度。
正相 NP-HPLC
一般用于手性純度，ee 值或 de 值檢測。
以上是我們常規(guī)的檢測方法。針對不同的產(chǎn)品，我們根據(jù)結(jié)構(gòu)性質(zhì)來選擇合適的方法，包括是否有紫外吸收，是否含手性中心，不同溶劑溶解性如何等等。部分產(chǎn)品如金屬絡(luò)合物、聚合物、無機鹽等不適合以上常規(guī)方法檢測，可以參考相關(guān)文獻測定紅外、紫外吸光度、滴定或者選擇其它檢測方式
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